[發明專利]一種基于反相色譜飛行時間質譜的喉癌血清差異代謝物的測定篩選方法

有效

• 申請號: 201610702483.9
• 申請日: 2016-08-23
• 公開（公告）號: CN106324173B
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 胡清源;侯宏衛;張小濤;陳歡;劉勇;王安;劉彤;韓書磊;付亞寧
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心;中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

1.一種基于反相色譜飛行時間質譜的喉癌血清差異代謝物的測定篩選方法，其特征在于：是以喉癌志愿者和健康志愿者血清為樣本進行測定、比較、篩選，具體包括以下工藝步驟：

a、血液在室溫下解凍，移取400 μL的血清，加入1200 μL的甲醇，渦旋混合15 s，然后以15800 g離心力在離心機中離心15 min；

b、移取370 μL的上清液于2 mL的離心管中，然后于真空離心機中離心干燥，然后復溶于200 μL的純水中，然后裝入色譜瓶中待測；

c、反相色譜飛行時間質譜對所有血清樣本進行逐一分析，得原始數據；

反相色譜條件為：采用ACQUITY UPLC? BEH柱 ，規格2.1 × 150 mm, 1.7 μm進行分離，柱子溫度為50 oC，流動相A為0.1%的甲酸水，流動相B為0.1%的甲酸乙腈，流動相流速為385 μL/min，梯度洗脫，總分析時間為38 min，進樣量為5 μL；梯度洗脫條件具體為：0-1min，5%B-5%B；1-10 min，5%B-20%B；10-12 min，20%B-60%B；12-33 min，60%B-100%B；33-35min，100%B-100%B；35-36 min，100%B-5%B，并維持2 min；

飛行時間質譜檢測器的條件：電噴霧離子源，多反應監測正離子掃描方式；噴霧電壓為3500 V，干燥氣為4 L/min ，霧化氣為0.04 MPa，碰撞能量為7 eV，傳輸時間為100 μs；

d、將原始數據轉換為mzXML的格式后，對數據進行峰對齊、校正、濾噪后，采用SIMCA-P多元數據分析軟件進行多變量統計分析，篩選VIP大于1的代謝物；

e、用SPSS進行T檢驗，對于P<0.05且VIP大于1的為潛在差異代謝物；

f、對于潛在差異代謝物，采用譜庫檢索或者標準品比對方法進行驗證，即為差異代謝物。