[發(fā)明專利]活化的人凝血因子VII融合蛋白及其制備方法與用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610692686.4
• 申請日: 2016-08-19
• 公開（公告）號: CN106279436B
• 公開（公告）日: 2017-10-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李強(qiáng);朱文臣;高永娟;朱成功;李媛麗;王曉山;孫乃超;劉賓;王文文;李智;劉婷婷;朱鹿燕;李亦清;任子甲;朱松林;肖春峰;蘇鴻聲
• 申請（專利權(quán)）人: 安源醫(yī)藥科技（上海）有限公司;輔仁藥業(yè)集團(tuán)有限公司;旭華（上海）生物研發(fā)中心有限公司;開封制藥（集團(tuán)）有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/64;C12N15/62;A61K38/48;A61K38/24;A61K47/68;A61P7/04
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1.一種活化的人凝血因子VII的融合蛋白，所述融合蛋白從N端至C端依次包含活化的人凝血因子VII、柔性肽接頭、至少1個人絨毛膜促性腺激素β亞基羧基末端肽剛性單元和延長半衰期部分；其中，延長半衰期部分選自人免疫球蛋白Fc片段或其變體、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白或PEG，

其中，所述柔性肽接頭具有以(GS)_a(GGS)_b(GGGS)_c(GGGGS)_d循環(huán)單元組合形成的氨基酸序列通式，其中a，b，c和d是大于或等于0的整數(shù)，且a+b+c+d≥1；且所述人絨毛膜促性腺激素β亞基的羧基末端肽剛性單元包含以下氨基酸序列：

(i)SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ；

(ii)PRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ；

(iii)SSSSKAPPPS；

(iv)SRLPGPSDTPILPQ。

2.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是糖基化的。

3.如權(quán)利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是通過在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)而糖基化的。

4.如權(quán)利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是通過在中國倉鼠卵巢細(xì)胞中表達(dá)而糖基化的。

5.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述人凝血因子VII的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

6.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述柔性肽接頭優(yōu)選自下組：

(i)GSGGGSGGGGSGGGGS；

(ii)GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；

(iii)GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；

(iv)GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；

(v)GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS。

7.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含1、2、3、4或5個人絨毛膜促性腺激素β亞基的羧基末端肽剛性單元。

8.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述人免疫球蛋白Fc變體具有降低的ADCC效應(yīng)和/或CDC效應(yīng)，和/或與FcRn受體的結(jié)合親和力增強(qiáng)。

9.如權(quán)利要求8所述的融合蛋白，其特征在于，所述Fc變體選自：

(i)含有Leu234Val、Leu235Ala和Pro331Ser突變的人IgG1絞鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)域；

(ii)含有Pro331Ser突變的人IgG2絞鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)域；

(iii)含有Thr250Gln和Met428Leu突變的人IgG2絞鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)域；

(iv)含有Pro331Ser、Thr250Gln和Met428Leu突變的人IgG2絞鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)域；

(v)含有Ser228Pro和Leu235Ala突變的人IgG4絞鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)域。

10.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示。

11.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的活性>15000IU/mg，和/或，所述融合蛋白在動物體內(nèi)循環(huán)半衰期至少延長1倍。

12.編碼如權(quán)利要求1-11中任一項所述的融合蛋白的DNA分子。

13.如權(quán)利要求12所述DNA分子，所述DNA分子的序列如SEQ ID NO：17所示。

14.一種載體，其特征在于，包含如權(quán)利要求12或13所述的DNA分子。

15.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，包含如權(quán)利要求14所述的載體，或者轉(zhuǎn)染了權(quán)利要求14所述的載體。

16.一種藥物組合物，其特征在于，包含藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑，以及有效劑量的如權(quán)利要求1-11中任一項所述的融合蛋白。