[發明專利]一種用于牛鼻支原體分離純化的培養基及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201610689925.0
• 申請日: 2016-08-19
• 公開（公告）號: CN106635865B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 郝華芳;陳勝利;儲岳峰;趙萍;劉永生
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12R1/35
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 張秋云

本發明公開了一種用于牛鼻支原體分離純化的培養基，每1000ml培養基中包括有以下組分：PPLO肉湯10.5 g、腦心浸出液8.0 g、氯化鈉4.0 g、硫酸鎂0.05 g、氯化鉀0.2 g、氯化鈣0.09 g、磷酸氫二鈉0.024 g、磷酸二氫鉀0.03 g、葡萄糖5.0 g、水解乳蛋白5.0 g、25%新鮮酵母浸出液60 ml、無菌豬血清100 ml、無菌馬血清100 ml、氨芐青霉素100 mg、10%醋酸鉈1 ml；并提供了其制備方法及應用。本發明的有益效果為：本發明提供的一種用于牛鼻支原體分離純化的培養基及其制備方法和應用，與現有技術相比，具有生長迅速和滴度高的特點，分離出牛鼻支原體的成功率高。

技術領域

本發明涉及獸醫生物技術領域，具體涉及一種用于牛鼻支原體分離純化的培養基及其制備方法和應用。

背景技術

牛鼻支原體（Mycoplasma bovirhinis），可引起牛肺炎、乳腺炎、結膜炎和生殖道炎癥。牛鼻支原體是一種重要卻往往被忽視的病原。早在1947年Edward 報道從流產奶牛生殖道分離到一株支原體（Edward , D. G et al. 1947)，后經鑒定并命名為牛鼻支原體（Edward and Freundt，1956）。牛鼻支原體呈全世界范圍分布。我國陳嘉棣等人在1985年報道從上海奶牛場分離到該菌，生理生化特性與定型菌株基本一致（陳嘉棣等，1985）。近些年，關于該菌與其他細菌如牛支原體、溶血性曼氏桿菌、多殺性巴氏桿菌混合感染，造成牛肺炎的病例屢見不鮮，給養牛業造成了嚴重經濟損失，逐漸引起了獸醫工作者、研究人員的重視。

牛鼻支原體是一類特殊的微生物，無細胞壁、由于其基因組很小、基因組中編碼氨基酸和輔助因子合成的基因很少，導致其生物合成和代謝的能力相當有限，僅在特定的環境下生存，因此牛鼻支原體對體外培養基的選擇也相當苛刻，需要從中攝取膽固醇、脂肪酸、核酸前體和能量來源等營養成分來促進自身繁殖。牛鼻支原體主要感染牛。關于牛鼻支原體的鑒定，目前主要依靠生理生化特性鑒定、聚合酶鏈式反應（Kobayashi H et al,1998; Miles K et al. 2004）和免疫試驗包括生長抑制試驗、代謝抑制試驗、免疫熒光試驗，而聚合酶鏈式反應和免疫實驗均涉及牛鼻支原體純培養物的分離與培養；而目前分離牛鼻支原體使用的主要為GS培養基和SP-4培養基，仍存在活菌滴度較低、繁殖能力差等問題，易產生漏診；因此，本領域亟需高效、快速分離診斷牛鼻支原體的培養基以及分離純化牛鼻支原體的方法，進而開展牛鼻支原體病原特性、培養特性、致病機理、疫苗制備、診斷與防控等研究。

發明內容

本發明的目的就是針對上述現有技術中的缺陷，提供了一種用于牛鼻支原體分離純化的培養基及其制備方法和應用。

為了實現上述目的，本發明提供的技術方案為：一種用于牛鼻支原體分離純化的培養基，每1000ml培養基中包括有以下組分：PPLO肉湯10.5 g、腦心浸出液8.0 g、氯化鈉4.0 g、硫酸鎂0.05 g、氯化鉀0.2 g、氯化鈣0.09 g、磷酸氫二鈉0.024 g、磷酸二氫鉀0.03g、葡萄糖5.0 g、水解乳蛋白5.0 g、25%新鮮酵母浸出液60 ml、無菌豬血清100 ml、無菌馬血清100 ml、氨芐青霉素100 mg、10%醋酸鉈1 ml。

進一步的，上述的一種用于牛鼻支原體分離純化的培養基，所述培養基為液體培養基形式或固體培養基形式。

進一步的，上述的一種用于牛鼻支原體分離純化的培養基，所述用于牛鼻支原體分離純化的液體培養基中，每1000ml液體培養基是由以下組分制備得到的：PPLO肉湯10.5g、腦心浸出液8.0 g、氯化鈉4.0 g、硫酸鎂0.05 g、氯化鉀0.2 g、氯化鈣0.09 g、磷酸氫二鈉0.024 g、磷酸二氫鉀0.03 g、葡萄糖5.0 g、水解乳蛋白5.0 g、25%新鮮酵母浸出液60ml、1%酚紅2.5 ml、無菌豬血清100 ml、無菌馬血清100 ml、氨芐青霉素100 mg、10%醋酸鉈1ml、余量為去離子水。