[發明專利]一種BRCA2基因突變體及其應用

在審

• 申請號: 201610685379.3
• 申請日: 2016-08-18
• 公開（公告）號: CN107760688A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 劉夢;王曉宏;邵康;曹博洋;李貴波;侯勇;朱師達
• 申請（專利權）人: 深圳華大基因研究院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/6886;C07K14/47;G01N33/68;C12M1/34
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技術領域

本發明涉及BRCA2基因突變體及其應用。具體地，本發明涉及分離編碼BRCA2突變體的核酸，分離的多肽，以及檢測BRCA2基因突變體的方法、系統和試劑盒。

背景技術

近年來我國癌癥的發病率和死亡率不斷攀升，惡性腫瘤已成為我國重大的公共衛生問題。據我國腫瘤登記中心2016年發布的結果顯示，2012年我國腫瘤新發病例數358.6萬例，死亡例數218.7萬例，粗發病率265/10萬，死亡率161.5/10萬。在惡性腫瘤發病現狀中，乳腺癌在女性惡性腫瘤中處于第一位，每年新發約27.3萬，且發病年齡不斷呈現年輕化趨勢，是嚴重威脅女性生命的第一殺手。

乳腺癌是具有很強遺傳背景的惡性腫瘤，現有研究顯示，5-10％的乳腺癌是由遺傳因素導致。目前BRCA1，BRCA2,TP53,PALB2,PTEN，CHEK2,ATM以及RAD50等基因被認定為乳腺癌易感基因，其中BRCA1和BRCA2基因為遺傳性乳腺癌的主要易感基因。研究表明，攜帶有BRCA1和BRCA2基因致病突變的人群在70歲之前發生乳腺癌的概率分別可達40–80％和20–85％。同時，已被診斷為遺傳性乳腺癌或卵巢癌的患者，發生復發轉移的可能性也高于普通人群。

BRCA1和BRCA2屬于抑癌基因，均呈常染色體顯性遺傳，且突變容易引發早年發病。BRCA2基因位于人類染色體13ql2,包含27個外顯子，編碼BRCA2蛋白含3418個氨基酸，對細胞生長的調節有重要作用。BRCA2基因發生突變后表達的蛋白質失去了修復DNA損傷的功能，導致染色體不穩定，促進腫瘤發生。男性BRCA2突變攜帶者終生患前列腺癌，乳腺癌，胰腺癌的概率分別為20％,6％和3％。而女性BRCA2突變攜帶者終生患乳腺癌為26％–84％，卵巢癌的概率為20％。BRCA2基因突變相關的腫瘤往往會表達ER(雌激素受體)與PR(孕激素受體)，與散發性乳腺癌表現出相似的特征。現已經報道的BRCA2突變種類數量多于1800，變異范圍達整個基因的編碼區。主要發生的突變為移碼突變，也會發生大量的錯義突變，但錯義突變大多屬于意義未明變異。因此發現BRCA2新的致病突變，對開展遺傳性乳腺癌的分子診斷具有重要意義。

區域捕獲測序是利用特制的DNA序列探針將全基因組中的特定區域捕獲下來，然后針對每個區域進行深度測序的技術，與傳統的連鎖分析、候選基因關聯分析技術相比，區域捕獲測序技術針對基因組內特定目標區域，目標集中，測序深度和精度更高。隨著區域捕獲測序等二代測序技術的廣泛應用，一批新的致病突變基因和新的致病位點被相繼發現，極大地推動了相關疾病及其防治措施的研究進程。

發明內容

本發明旨在提供一種與遺傳性乳腺癌相關的BRCA2基因突變體及其在制備檢測生物樣品是否含有BRCA2基因突變體的試劑盒方面的應用,同時還提供了一種檢測BRCA2基因突變的方法與系統。

本發明采用區域捕獲測序技術，針對一個常染色體顯性遺傳的遺傳性乳腺癌家系進行了特定區域的高通量測序，結合生物信息分析發現BRCA2基因上的c.3467delC(p.S1156fs)突變與遺傳性乳腺癌有關，并通過共分離實驗等方法驗證了這一變異，將會為遺傳性乳腺癌發病機制的研究奠定重要基礎，也有可能為遺傳性乳腺癌患者治療提供全新的理論依據，豐富和完善遺傳性乳腺癌疾病的診斷流程，從而對遺傳性乳腺癌患者的臨床診斷提供更多的支持和參考，為開發有效的致病基因篩查和干預治療措施提供科學依據。

根據本發明的第一方面，本發明提供了一種分離的BRCA2突變體的核酸。根據本發明的實施例，所述核酸具有如SEQ ID NO：3所示的序列，與SEQ ID NO：1相比，具有c.3467delC突變，即相對于野生型BRCA2基因，本發明的BRCA2基因突變體的cDNA第3467位剪切位點缺失了堿基C，發生了移碼突變。

根據本發明的第二方面，本發明提供了所述突變體核酸在制備用于檢測生物樣本是否存在BRCA2基因突變的試劑盒中的應用。所述的試劑盒還含有適于檢測BRCA2基因突變的試劑，任選地，所述試劑為該核酸探針或引物。任選地，所述核酸探針或引物具有如SEQ ID NO：5-6所示的核苷酸序列。