[發明專利]一種exosome來源的與肝癌相關的miRNA標志物及其應用

在審

• 申請號: 201610675107.5
• 申請日: 2016-08-17
• 公開（公告）號: CN107760781A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 周宇;陳莉
• 申請（專利權）人: 周宇;陳莉
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物醫學領域，具體涉及一種exosome來源的與人類肝癌相關的miRNA標志物及其用途，更具體的涉及人類血液中腫瘤源性的exosome來源的miRNA-46a及其在診斷肝癌中的應用。

背景技術

微小RNA(microRNA，miRNA)來源于長鏈RNA初始轉錄產物(Pri-miRNA)，Pri-miRNA在細胞核中經酶切作用，形成具有莖環結構的miRNA前體，miRNA前體轉運至胞質后，被進一步加工成miRNA；成熟的miRNA在特定的宿主細胞內與脂質或脂蛋白結合形成微囊泡，以外切酶體形式分泌至胞外，經體液微循環，被內吞入特定的受體細胞內發揮特定調節功能。腫瘤相關miRNA可能來源于腫瘤細胞死亡、溶化或腫瘤細胞向周圍環境所釋放的miRNA。miRNA可在轉錄后水平通過與靶基因特異性的堿基互補配對，引起靶基因的降解或者抑制其翻譯，調控癌基因和/或抑癌基因的表達，廣泛參與腫瘤細胞增殖、凋亡、分化侵襲、遷移血管生成等，與多種腫瘤的發生發展及預后關系密切。因此，有學者提出了“癌microRNA”(OncomiRs)的觀點，即認為某些miRNA的異常表達在腫瘤的發生發展中充當了類似癌基因的角色。

Exosomes是一種納米級的小囊泡狀結構，存在于血液或其他生物體液中。它形成于眾多細胞(包括樹突狀細胞和腫瘤細胞)的胞吐作用。Exosomes的外膜是由脂質雙分子層組成，其成分包含有選擇性蛋白、mRNA和miRNA。在Exosomes中包含有大于120種的miRNA，exosome中的miRNA可以影響干細胞變異(let-7)、器官形成(miR-1)、造血作用(miR-181)、腫瘤發生(miR-17、miR-18、miR-19a、miR-20、miR-19b-1、miR-93-1)以及新陳代謝。

肝癌是嚴重威脅我國人民生活健康的疾病之一，其致死率位居第三位。全世界每年因肝癌死亡的患者中，約有40％來自中國。80％的肝癌常與慢性乙型肝炎病毒和/或丙型肝炎病毒感染有關。如此高的致死率是因為缺乏敏感而特異的無創性指標來進行早期診斷。由于早期肝癌癥狀不明顯，通常在晚期才得以確診，那時，由于大多存在癌細胞肝內或/及肝外轉移，病人已經喪失了手術切除病灶的機會。

隨著治療方法和影像檢測技術水平的提高，早期肝癌根治切除術后的五年生存率已大大提高。然而，由于大部分的肝癌患者在確診的時候已經處于晚期，肝癌患者的整體治療效果及病人預后都比較差。目前臨床應用多種治療手段(手術切除、放療，化療及聯合治療方法)，仍無法徹底解決腫瘤治療中存在的復發和轉移的問題。秉承早發現早治療的原則，及早發現肝癌的發生和轉移，對于改善患者預后，提高臨床治療效果至關重要。

目前對于肝癌的診斷主要依靠影像學上發現肝內腫物，包括超聲、CT、核磁共振(MRI)等，同時結合血清中的腫瘤標志物如甲胎蛋白(AFP)等。但是，這兩種方法的敏感性及特異性都不是十分令人滿意。因此，開發一種高敏感性和特異性的肝癌診斷方法是亟待解決的問題。

發明內容

為了解決現有技術的不足，本發明提供了一種血液中腫瘤源性的exosome來源的與肝癌相關的miRNA標志物，所述標志物是exsome來源的miRNA-46a，其序列為：5’-UUCAUUCAUUACUUUUGUACGC-3’。

本發明還提供了exsome來源的miRNA-46a在診斷人類肝癌中的用途。

本發明還提供了一種檢測腫瘤源性的exosome來源的與肝癌相關的miRNA-46a標志物的試劑，所述試劑是用于擴增所述miRNA-46a的引物對，或者是用于檢測所述miRNA-46a的探針；優選地，用于擴增所述miRNA-46a的正向引物為：5’-actcaccagctggccattattacttttggta-3’，反向引物為：5’-cgccgcagtgcgtgtcgtggagt-3’；

本發明還提供了一種診斷人類肝癌的試劑盒，其包含檢測腫瘤源性的exosome來源的miRNA-46a標志物的試劑，所述試劑是用于擴增所述miRNA-46a的引物對，或者是用于檢測所述miRNA-46a的探針。進一步地，所述試劑盒還包含PCR反應常用的試劑和酶，所述常用試劑包含PCR反應緩沖液、核糖核酸酶抑制劑、dNTP等；所述酶包含M-MLV逆轉錄酶、polyA多聚酶；所述試劑盒還可以包括標準品和/或對照品。