[發明專利]一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法

有效

• 申請號: 201610672023.6
• 申請日: 2016-08-16
• 公開（公告）號: CN106278981B
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 杜希萍;黃瑩;王凱;倪輝;楊遠帆;李利君;姜澤東;肖安風;黃高凌;蔡慧農
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: C07C403/24
• 分類號: C07C403/24
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物制劑技術領域，尤其涉及一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法。

背景技術

雨生紅球藻是一種廣泛分布于自然界的淡水藻，屬于綠藻門、綠藻綱、團藻目、紅球藻科、紅球藻屬。雨生紅球藻通常只有處于脅迫條件時才開始積累蝦青素，以渡過不利的環境條件。關于雨生紅球藻積累蝦青素的營養鹽及環境條件的研究表明，當其處于氮饑餓、高光強等條件下時，能夠大量積累蝦青素。近年來，光生物反應器技術的發展大大促進了雨生紅球藻的養殖及蝦青素的積累，應用這種技術可使藻體中蝦青素含量達到干重的1.5-3％。

從雨生紅球藻中提取蝦青素的方法多種多樣，歐陽琴等對雨生紅球藻厚壁孢子細胞的幾種常用機械破壁方法的工藝條件分別進行研究，分別比較了幾種不同破壁方法對破壁率和蝦青素提取率的影響，結果表明高壓均質法最適合于雨生紅球藻中厚壁孢子的破碎和蝦青素的提取，氯仿:乙醇(1:1，v/v)的混合溶劑最有利于從雨生紅球藻孢子態細胞中提取出蝦青素。Dong等人比較了4種不同的方法從雨生紅球藻中提取蝦青素，結果表明鹽酸破壁后用丙酮提取的得率最高，且這種方法得到的粗提物的DPPH自由基清除能力也最高。周錦珂以雨生紅球藻粉為原料利用纖維素酶對雨生紅球藻進行酶解處理，然后用乙醇提取蝦青素，在最佳條件下蝦青素的提取率高達94.6％。

蝦青素末端環狀結構中各有一個羥基(-OH)，這種自由羥基可與脂肪酸形成酯，雨生紅球藻中的蝦青素多數以酯的形式存在。如果其中一個羥基與脂肪酸成酯，稱蝦青素單酯；如果兩個羥基都與脂肪酸成酯，則稱為蝦青素雙酯。在魚類吸收和色素沉積方面，蝦青素酯和游離蝦青素在生物利用方面差別很小。由于能夠與蝦青素酯化形成蝦青素單酯和雙酯的脂肪酸種類繁多，而且蝦青素酯的極性比蝦青素更小，且各類蝦青素酯的結構極性相近，很難將單獨一種蝦青素酯分離純化出來；采用傳統柱層析法分離純化蝦青素酯，耗時長且得率很低，不利于大量制備純的蝦青素酯。因此，對蝦青素酯分離純化的研究鮮見報道。有鑒于此，本發明人研究和設計了一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法，本案由此產生。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法。

為了實現上述目的，本發明解決其技術問題所采取的技術方案是：

一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法，包括以下步驟：

步驟一、粗提液的制備：

用天平稱取5.0g雨生紅球藻藻粉，加入濃度為0.5-0.7mg/mL的纖維素酶液200mL，酶反應pH為4.0-5.0，在45-50℃的條件下破壁25-30min，然后在5000rpm條件下離心5min，棄上清后，將500mL的丙酮加入藻粉中，浸提40min，再次離心后，棄去下層沉淀，制得粗提液；將所述粗提液濃縮蒸干，充氮，于-20℃條件下保存，備用；

步驟二、溶劑系統的建立：

按體積比4:1:2配制正己烷-乙腈-甲醇一級溶劑系統和按體積比2:1配制正己烷-甲醇二級溶劑系統；每個溶劑系統分別按照上述比例配制溶液1500mL，置于分液漏斗中，劇烈振蕩充分混合后靜置分層，平衡后將上下兩相分開，兩個溶劑系統均以下相作為流動相，上相作為固定相，在使用前上下相分別超聲脫氣30min；

步驟三、高速逆流色譜純化：

打開泵，將超聲脫氣后的上相作為固定相以30mL/min的流速泵入到高速逆流色譜儀中，直至上相充滿整個HSCCC分離管中，暫停泵，將進液端放到流動相的試劑瓶中，打開主機的電源，設定轉速850r/min，啟動泵；在出液端用干凈的量筒接液，在474nm波長下采集數據，首先以所述一級溶劑系統為實驗條件，收集洗脫時間為12-20min的組分，再以二級溶劑系統為實驗條件，將該組分溶解在二級溶劑系統的下相中，收集洗脫時間為40-48min的組分，初步用TLC分析流出物，合并相同組分，制得化合物，即蝦青素亞麻酸單酯。

作為實施例的優選方式，還包括步驟四、純化物的鑒定：采用高效液相色譜HPLC法或采用ESI-MS法分析所述化合物，或采用高效液相色譜HPLC法分析皂化后的所述化合物。

作為實施例的優選方式，所述采用高效液相色譜HPLC法：將所述化合物配成2mg/mL的樣品溶液，高效液相的條件：進樣量5μL，柱溫35℃，檢測波長474nm，流速0.2mL/min；分析所述化合物的保留時間和特征吸收峰，判斷所述述化合物的保留時間是否為45.5min，特征吸收峰是否為447nm。