[發(fā)明專利]一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610672023.6
• 申請(qǐng)日: 2016-08-16
• 公開（公告）號(hào): CN106278981B
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜希萍;黃瑩;王凱;倪輝;楊遠(yuǎn)帆;李利君;姜澤東;肖安風(fēng);黃高凌;蔡慧農(nóng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 集美大學(xué)
• 主分類號(hào): C07C403/24
• 分類號(hào): C07C403/24
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟一、粗提液的制備：

用天平稱取5.0g雨生紅球藻藻粉，加入濃度為0.5-0.7mg/mL的纖維素酶液200mL，酶反應(yīng)pH為4.0-5.0，在45-50℃的條件下破壁25-30min，然后在5000rpm條件下離心5min，棄上清后，將500mL的丙酮加入藻粉中，浸提40min，再次離心后，棄去下層沉淀，制得粗提液；將所述粗提液濃縮蒸干，充氮，于-20℃條件下保存，備用；

步驟二、溶劑系統(tǒng)的建立：

按體積比4:1:2配制正己烷-乙腈-甲醇一級(jí)溶劑系統(tǒng)和按體積比2:1配制正己烷-甲醇二級(jí)溶劑系統(tǒng)；每個(gè)溶劑系統(tǒng)分別按照上述比例配制溶液1500mL，置于分液漏斗中，劇烈振蕩充分混合后靜置分層，平衡后將上下兩相分開，兩個(gè)溶劑系統(tǒng)均以下相作為流動(dòng)相，上相作為固定相，在使用前上下相分別超聲脫氣30min；

步驟三、高速逆流色譜純化：

打開泵，將超聲脫氣后的上相作為固定相以30mL/min的流速泵入到高速逆流色譜儀中，直至上相充滿整個(gè)HSCCC分離管中，暫停泵，將進(jìn)液端放到流動(dòng)相的試劑瓶中，打開主機(jī)的電源，設(shè)定轉(zhuǎn)速850r/min，啟動(dòng)泵；在出液端用干凈的量筒接液，在474nm波長(zhǎng)下采集數(shù)據(jù)，首先以所述一級(jí)溶劑系統(tǒng)為實(shí)驗(yàn)條件，收集洗脫時(shí)間為12-20min的組分，再以二級(jí)溶劑系統(tǒng)為實(shí)驗(yàn)條件，將該組分溶解在二級(jí)溶劑系統(tǒng)的下相中，收集洗脫時(shí)間為40-48min的組分，初步用TLC分析流出物，合并相同組分，制得化合物，即蝦青素亞麻酸單酯。

2.如權(quán)利要求1所述的一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法，其特征在于：還包括步驟四、純化物的鑒定：采用高效液相色譜HPLC法或采用ESI-MS法分析所述化合物，或采用高效液相色譜HPLC法分析皂化后的所述化合物。

3.如權(quán)利要求2所述的一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法，其特征在于：所述采用高效液相色譜HPLC法：將所述化合物配成2mg/mL的樣品溶液，高效液相的條件：進(jìn)樣量5μL，柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)474nm，流速0.2mL/min；分析所述化合物的保留時(shí)間和特征吸收峰，所述化合物的保留時(shí)間為45.5min，特征吸收峰為447nm。

4.如權(quán)利要求2所述的一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法，其特征在于：所述ESI-MS法采用正離子模式；參數(shù)設(shè)置如下：氮?dú)飧稍锪髁?0.0L/min，霧化壓力為20psi，毛細(xì)管電壓+5000V，端板電壓+4000V，毛細(xì)管出口電壓80V，干燥溫度200℃，霧化室溫度50℃，干燥氣體壓力20psi，霧化氣體壓力50psi；一級(jí)質(zhì)譜m/z為m/z 857.8和m/z 879.9。

5.如權(quán)利要求2所述的一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法，其特征在于：采用高效液相色譜HPLC法分析皂化后的所述化合物：將所述化合物12.5mg溶解在150mL的二氯甲烷溶液中，作為每組試驗(yàn)的樣品溶液，然后加入含質(zhì)量體積濃度為15.6％的NaOH的甲醇溶液，在磁力攪拌條件下，15.14℃溫度下反應(yīng)9.17min后，終止反應(yīng)；加入蒸餾水直至溶液出現(xiàn)分層，上層漂浮有白色泡沫，下層呈紅色的澄清溶液，離心棄去上清后，將下層溶液完全蒸干得到皂化產(chǎn)物，用HPLC法分析產(chǎn)物的保留時(shí)間和特征吸收峰，皂化后的所述化合物的保留時(shí)間為13min。

6.如權(quán)利要求1所述的一種蝦青素亞麻酸單酯的制備方法，其特征在于：所述步驟一中，加入濃度為0.6mg/mL的纖維素酶液200mL，在50℃的條件下破壁30min。