[發(fā)明專利]一種生物生產(chǎn)羥基酪醇的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201610662962.2
• 申請日: 2016-08-10
• 公開（公告）號: CN107723306A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發(fā)明（設計）人: 趙廣榮;馬雅婷
• 申請（專利權(quán)）人: 天津大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N1/21;C12P7/22;C12R1/19
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所12201
• 代理人: 陸藝

1.一種產(chǎn)羥基酪醇的重組菌的構(gòu)建方法，其特征是包括如下步驟：

(1)人工全合成帶trc啟動子的酮基脫羧酶基因kdc，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；人工全合成帶tac啟動子的4-羥基苯乙酸-3-單加氧酶基因hpaBC，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；全合成載體骨架pBPE004，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

(2)將SEQ ID No.1所示核苷酸序列和SEQ ID No.2所示核苷酸序列通過酶切連接方式與SEQ ID No.3所示核苷酸序列連接，篩選陽性克隆得到重組載體pKB；

(3)將重組載體pKB轉(zhuǎn)化到宿主菌SyBE-002447中，得到產(chǎn)羥基酪醇的重組菌SyBE-KB1菌株。

2.權(quán)利要求1的方法構(gòu)建的產(chǎn)羥基酪醇的重組菌SyBE-KB1菌株。

3.權(quán)利要求2的SyBE-KB1菌株生物生產(chǎn)羥基酪醇的方法，其特征是包括如下步驟：將重組菌SyBE-KB1接種在LB培養(yǎng)基中，35-38℃，200-250rpm，震蕩培養(yǎng)2-4h，轉(zhuǎn)接到含有葡萄糖的M9培養(yǎng)基中進行發(fā)酵生產(chǎn)羥基酪醇。

4.一種產(chǎn)羥基酪醇的重組菌的構(gòu)建方法，其特征是包括如下步驟：

(1)人工全合成帶trc啟動子的酮基脫羧酶基因kdc，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；人工全合成帶tac啟動子的4-羥基苯乙酸-3-單加氧酶基因hpaBC，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

(2)將SEQ ID No.1所示核苷酸序列通過λRed同源重組技術(shù)整合到大腸桿菌SyBE-002447染色體中，得到SyBE-KDC菌株；

(3)將SEQ ID No.2所示核苷酸序列，通過λRed同源重組技術(shù)整合到大腸桿菌SyBE-KDC菌株中，得到產(chǎn)羥基酪醇的重組菌SyBE-KB2菌株。

5.權(quán)利要求4的方法構(gòu)建的產(chǎn)羥基酪醇的重組菌SyBE-KB2菌株。

6.權(quán)利要求5的SyBE-KB2菌株生物生產(chǎn)羥基酪醇的方法，其特征是包括如下步驟：將重組菌SyBE-KB2接種在LB培養(yǎng)基中，35-38℃，200-250rpm，震蕩培養(yǎng)2-4h，轉(zhuǎn)接到含有葡萄糖的M9培養(yǎng)基中進行發(fā)酵生產(chǎn)羥基酪醇。