[發明專利]一種高產茶褐素的黑曲霉菌株及其應用

有效

• 申請號: 201610662623.4
• 申請日: 2016-08-12
• 公開（公告）號: CN106635820B
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發明（設計）人: 高學玲;岳鵬翔;王玉婉;張正竹;宛曉春;黃志海;羅鵬
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A23F3/10;C12R1/685
• 代理公司: 合肥市科融知識產權代理事務所(普通合伙) 34126
• 代理人: 宣圣義

本發明提供了一種黑曲霉菌株及其應用，屬于微生物技術領域，該菌株在發酵綠茶茶湯濃縮液時，具有高產茶褐素類物質的特點，可用于發酵制備茶褐素提取物，本發明還提供了該黑曲霉菌株在液態發酵綠茶濃縮液中的應用，能顯著提高發酵液中茶褐素的產量。本發明保藏的黑曲霉可以應用于低檔綠茶、粗老的茶葉及碎茶液態發酵，以制備茶褐素或直接制備高茶褐素速溶黑茶。同時，液態發酵生產工藝簡單，發酵成本低，還可提高產品的安全性，適合于工業化大規模生產。

技術領域

本發明屬于微生物發酵領域，具體涉及一種高產茶褐素的黑曲霉菌株及應用。

背景技術

黑曲霉是一種廣泛存在于自然界的腐生真菌，其分生孢子頭呈褐黑色放射狀，分生孢子梗長短不一，頂囊球形，雙層小梗，多見于糧食、植物性產品和土壤中。黑曲霉又是重要的工業發酵微生物，在工業酶制劑、有機酸發酵方面應用廣泛。可生產淀粉酶、酸性蛋白酶、纖維素酶、果膠酶、葡萄糖氧化酶等超過30種酶制劑。因為黑曲霉出色的蛋白質分泌能力，黑曲霉也被開發為通用的異源蛋白表達載體。黑曲霉是檸檬酸、葡糖酸和沒食子酸等的主要生產菌。

黑曲霉具有強大的聚合物降解酶系，賦予其在各種廉價的培養基上快速生長和發酵的能力，能夠在極低的pH下保持旺盛的代謝活性因而不易染菌，能夠適應工業發酵中粗放的物料和理化環境，這些品質使黑曲霉成為一種不可多得的工業生產宿主菌，即細胞工廠。

茶葉中的多酚類物質是茶葉中的重要活性物質，是茶葉中多種酚類化合物的總稱，是茶樹鮮葉的主要組成成分，其中以兒茶素為其主體成分，占多酚類物質總量的60％～80％，與茶的湯色、滋味和香氣都有著密切的關系。

多酚類物質的水溶性產物主要是茶黃素、茶紅素和茶褐素。茶褐素是兒茶素氧化聚合形成的一類結構十分復雜的產物的總稱，在普洱茶的加工過程中80％的茶黃素和茶紅素氧化、聚合，形成茶褐素，并使其含量成倍增加，從而使茶湯的收斂性和苦澀味降低。

研究表明茶褐素是黑茶中主要功能和特征性成分，其含量對黑茶品質至關重要。研究表明，茶褐素能夠降低小鼠血清中血糖，膽固醇，甘油三酯含量，具有較強的清除自由基能力，具有抗氧化作用。對減肥降脂，預防高血脂癥具有顯著的作用。毒理學實驗證明，茶褐素無毒安全。這些結果表明，茶褐素具有較好的應用前景。

發明內容

本發明的目的提供一種黑曲霉菌株，該菌株具有高產茶褐素的特點，可用于制備茶褐素提取物，該菌株已于2015年8月26日保藏于黑曲霉菌種保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(China General Microbiological Culture CollectionCenter,CGMCC)，該黑曲霉菌株的保藏號為：CGMCC No.11276，拉丁名：Aspergillus niger，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

本發明還提供了一種黑曲霉菌株在綠茶濃縮液液態發酵中的應用，不僅能提高綠茶濃縮液液態發酵茶褐素的產量。

本發明的黑曲霉菌株來源于室溫放置1年的速溶綠茶粉中，具體分離方法為：在超凈工作臺中，取適量貯藏1年速溶綠茶粉溶于100mL無菌水中，置于溫度37℃，轉數150r/min的搖床中培養4天后，挑取培養液中的菌絲接種于PDA平板；將接種菌絲的PDA平板置于37℃恒溫培養箱中培養4天，然后挑取單一的黑色孢子于查氏選擇培養基中重復劃線培養2-3次，進一步分離純化，直至查氏選擇培養基平板上只有單一霉菌為止。挑取該純種的霉菌，接種至PDA平板上并置于37℃恒溫培養箱中培養4天，得到本發明保藏的黑曲霉菌株。將菌種放置于4℃保存，備用。

菌落形態特征：菌落在20～30mm之間，菌落較大，地毯式蔓延生長，呈同心輪紋狀，菌落正面黑色，邊緣產生白色次生菌絲，反面灰黑色；在在顯微鏡下觀察，菌絲有隔，在菌絲的壁厚而膨大成“足細胞”，產生分生孢子梗，無隔，梗頂端膨大成球狀泡囊，即為分生孢子頭。