[發(fā)明專利]裂解液、提取液、裂解和提取方法、試劑盒及應(yīng)用、PCR體系

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610656613.X
• 申請日: 2016-08-11
• 公開（公告）號: CN106282160B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 管峰;薛超波;趙進;王萍亞
• 申請（專利權(quán)）人: 中國計量大學(xué);舟山市食品藥品檢驗檢測研究院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京三高永信知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11138
• 代理人: 江崇玉

本發(fā)明公開了一種裂解液、DNA提取液、裂解和提取方法、DNA提取試劑盒及應(yīng)用、PCR體系。該裂解液，用于裂解魚類組織而釋放出DNA，包括：乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸鈉鹽、氯化鈉、十二烷基硫酸鈉、強堿以及水，其中相對于裂解液而言，乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸鈉鹽的摩爾濃度為2～10mM，氯化鈉的摩爾濃度為1～10mM，十二烷基硫酸鈉的質(zhì)量分數(shù)為0.1～10％，并且強堿的氫氧根離子的摩爾濃度為100～300mM。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的裂解液可以在更短時間內(nèi)提供魚類組織PCR擴增所需的DNA模板，整個過程不會造成樣本DNA的減少或丟失，并且操作簡單方便，易于掌握。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種裂解液、魚類組織DNA提取液、裂解方法、提取魚類組織DNA的方法、魚類組織DNA提取試劑盒及其應(yīng)用、擴增魚類組織DNA的PCR體系。

背景技術(shù)

動物組織DNA提取的主要方法有蛋白酶裂解后的酚-氯仿提取、異丙醇或異戊醇提取和SDS法，還有針對線粒體DNA提取的氯化銫沉淀法、chelex-100或吐溫(Tween)法和尿素提取法等，目前應(yīng)用較為廣泛的是相對簡單方便的商業(yè)化動物組織DNA提取試劑盒。通過這些方法獲得的基因組DNA，一般能去除原來組織樣本中的蛋白質(zhì)和脂肪，還能通過醇類沉淀去除酚類等試劑，所得DNA純度較高，能夠滿足大部分實驗要求。

獲取動物組織DNA是PCR分析和其他分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)，這些技術(shù)和分析方法被應(yīng)用到諸多研究和檢測領(lǐng)域，如對核DNA或線粒體DNA的遺傳多樣性分析、物種鑒定和目前DNA條形碼技術(shù)分析等。但很多時候根據(jù)實驗?zāi)康牟煌?，對DNA純度的要求也不同，在一些快速分析檢測中更加注重DNA提取過程的快速、準(zhǔn)確和靈敏性。

魚類組織具有易變質(zhì)腐敗，保存難度大于其他肉類的特點。因此，在提取魚類組織DNA時，要求提取過程快速準(zhǔn)確。然而，上述各種動物組織DNA提取方法由于操作過程復(fù)雜、步驟繁瑣、耗時長，并且提取試劑復(fù)雜，往往不能滿足魚類組織DNA提取的需要，有時還會因試劑殘留而影響后續(xù)PCR擴增過程，甚至微量樣品處理后DNA總量不足難以進行PCR擴增，尤其難以滿足于快速檢測和鑒定領(lǐng)域。此外，個別提取方法，如酚-氯仿提取法，還具有毒性強，對研究者健康損害大的缺點。對于某一特定的魚類肌肉組織，如魚類肌肉還具有脂肪含量低，易于處理，細胞裂解后即可釋放DNA，鱗片和魚鰭類似于哺乳動物的指甲，含有大量的角蛋白，對其進行DNA提取時，不需過多的去除脂肪，而要去除大量的角蛋白。而現(xiàn)有動物組織DNA提取方法在于去除組織中的蛋白質(zhì)和脂肪。很顯然，現(xiàn)有的動物組織DNA的提取方法不利于魚類研究。

因此，亟需一種能夠快速準(zhǔn)確提取魚類組織中DNA的方法，以利于后續(xù)在魚類快速檢測和鑒定中的研究。

發(fā)明內(nèi)容

針對魚類組織的特點，本發(fā)明實施例公開了一種魚類組織DNA提取液及提取方法，以達到快速提取魚類組織中DNA的目的，從而加快魚類快速檢測和鑒定等研究。

本發(fā)明提供了一種裂解液，其用于裂解魚類組織而釋放出DNA，包括：

乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸鈉鹽、氯化鈉、十二烷基硫酸鈉、強堿以及水，

其中相對于裂解液而言，乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸鈉鹽的摩爾濃度為2～10mM，氯化鈉的摩爾濃度為1～10mM，十二烷基硫酸鈉的質(zhì)量分數(shù)為0.1～10％，并且強堿的氫氧根離子的摩爾濃度為100～300mM。

優(yōu)選地，所述乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸鈉鹽的摩爾濃度為3～8mM；所述氯化鈉的摩爾濃度為3～7mM；所述十二烷基硫酸鈉的質(zhì)量分數(shù)為0.5～5％；所述強堿的氫氧根離子的摩爾濃度為150～250mM。

更優(yōu)選地，所述乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸鈉鹽的摩爾濃度為5mM；所述氯化鈉的摩爾濃度為5mM；所述十二烷基硫酸鈉的質(zhì)量分數(shù)為1％；所述強堿的氫氧根離子的摩爾濃度為200mM。