[發明專利]裂解液、提取液、裂解和提取方法、試劑盒及應用、PCR體系

有效

• 申請號: 201610656613.X
• 申請日: 2016-08-11
• 公開（公告）號: CN106282160B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: 管峰;薛超波;趙進;王萍亞
• 申請（專利權）人: 中國計量大學;舟山市食品藥品檢驗檢測研究院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京三高永信知識產權代理有限責任公司 11138
• 代理人: 江崇玉

1.一種雙組分型魚類組織DNA提取液，其特征在于，包括作為第一組分的裂解液和作為第二組分的中和液，

所述裂解液由以下組分組成：

乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸鈉鹽、氯化鈉、十二烷基硫酸鈉、強堿以及水，

其中相對于裂解液而言，乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸鈉鹽的摩爾濃度為2～10mM，氯化鈉的摩爾濃度為1～10mM，十二烷基硫酸鈉的質量分數為0.1～10％，并且強堿的氫氧根離子的摩爾濃度為100～300mM；

所述中和液包括：含有吐溫-20的pH值為6.4～7.4的Tris-HCl緩沖液，其中所述中和液中的吐溫-20的質量分數為0.02％～0.1％，所述中和液中的Tris的摩爾濃度為0.2～1mM。

2.根據權利要求1所述的雙組分型魚類組織DNA提取液，其特征在于，

所述乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸鈉鹽的摩爾濃度為3～8mM；所述氯化鈉的摩爾濃度為3～7mM；所述十二烷基硫酸鈉的質量分數為0.5～5％；所述強堿的氫氧根離子的摩爾濃度為150～250mM。

3.根據權利要求1所述的雙組分型魚類組織DNA提取液，其特征在于，

所述乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸鈉鹽的摩爾濃度為5mM；所述氯化鈉的摩爾濃度為5mM；所述十二烷基硫酸鈉的質量分數為1％；所述強堿的氫氧根離子的摩爾濃度為200mM。

4.根據權利要求1至3任一項所述的雙組分型魚類組織DNA提取液，其特征在于，

所述強堿選自NaOH和/或KOH。

5.根據權利要求4所述的DNA提取液，其特征在于，所述中和液包括：含有吐溫-20的pH值為6.8的Tris-HCl緩沖液，其中所述中和液中的吐溫-20的質量分數為0.05％；所述中和液中的Tris的摩爾濃度為0.5mM。

6.根據權利要求4所述的DNA提取液，其特征在于，所述中和液還包含以下物質中的至少一種：

牛血清白蛋白，

明膠，和

二硫蘇糖醇。

7.根據權利要求6所述的DNA提取液，其特征在于，基于所述中和液的總體積，所述中和液還包含0.02～0.1mg/mL的牛血清蛋白、0.2～2mg/mL的明膠和0.02～1mg/mL的二硫蘇糖醇中的至少一種。

8.一種提取魚類組織DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：

將魚類組織與權利要求1至7任一項所述的裂解液混合，在20～85℃的水浴中保持10～30min，再與權利要求1至7任一項所述的中和液混合，之后離心處理，獲得的上清液即為含有DNA的溶液。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，在50～65℃的水浴中保持10～20min。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，在55℃的水浴中保持10min。

11.根據權利要求8至10任一項所述的方法，其特征在于，所述裂解液和所述中和液的體積比為10:3～6。

12.根據權利要求11所述的方法，所述魚類組織與所述裂解液的比例為10～25mg:200～400μl。

13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于，所述魚類組織、所述第一組分和所述第二組分的比例為25mg:400μL:120μL。

14.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述混合的方式為振蕩。

15.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述魚類組織選自：肌肉、內臟、魚鰭、鱗片或骨骼。