[發明專利]用于多重核酸測序的標簽和引物

有效

• 申請號: 201610645098.5
• 申請日: 2016-08-08
• 公開（公告）號: CN106282332B
• 公開（公告）日: 2019-11-15
• 發明（設計）人: 王緒敏;劉貴明;趙倍倫;宋利璞;于軍
• 申請（專利權）人: 中國科學院北京基因組研究所
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12Q1/04;C12N15/11;C40B50/06
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1.一組用于構建土壤樣品中真菌ITS序列多重測序文庫的PCR引物，其特征在于：所述的一組PCR引物包括正向引物組和反向引物組；

所述的正向引物組由以下引物組成：

引物F1：其序列為SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，其中含有Index1：ACGATGCT；

引物F2：其序列為SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，其中含有Index2：AGACTGTC；

引物F3：其序列為SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，其中含有Index3：AGCATCGT；

引物F7：其序列為SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列，其中含有Index7：ATCGTAGC；

引物F8：其序列為SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列，其中含有Index8：CAGACTGT；

引物F9：其序列為SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列，其中含有Index9：CGATGCTA；

引物F12：其序列為SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列，其中含有Index12：CGTAGCAT；

引物F13：其序列為SEQ ID NO：13所示的核苷酸序列，其中含有Index13：CTACGATG；

引物F14：其序列為SEQ ID NO：14所示的核苷酸序列，其中含有Index14：GACAGTCT；

引物F23：其序列為SEQ ID NO：23所示的核苷酸序列，其中含有Index23：GCATCGTA；

所述的反向引物組由以下引物組成：

引物R15：其序列為SEQ ID NO：44所示的核苷酸序列，其中含有Index15：CTCTGCCT；

引物R17：其序列為SEQ ID NO：46所示的核苷酸序列，其中含有Index17：CCTACTAT；

引物R18：其序列為SEQ ID NO：47所示的核苷酸序列，其中含有Index18：CGATGCTG；

引物R19：其序列為SEQ ID NO：48所示的核苷酸序列，其中含有Index19：ATGCTAAT；

引物R21：其序列為SEQ ID NO：50所示的核苷酸序列，其中含有Index21：GCGTCTAT；

引物R25：其序列為SEQ ID NO：54所示的核苷酸序列，其中含有Index25：GGAGTCCT；

引物R26：其序列為SEQ ID NO：55所示的核苷酸序列，其中含有Index26：GCTCGAGC；

引物R27：其序列為SEQ ID NO：56所示的核苷酸序列，其中含有Index27：AAGGCATA；

引物R28：其序列為SEQ ID NO：57所示的核苷酸序列，其中含有Index28：ACTGCGGA；

引物R29：其序列為SEQ ID NO：58所示的核苷酸序列，其中含有Index29：AGGCGCTA。

2.如權利要求1所述的PCR引物，其特征在于：所述的PCR引物在使用時：所述的正向引物組中的任意一條引物和反向引物組中的任意一條引物兩兩配對組成引物對，通過PCR反應用于擴增樣品中的ITS序列；獲得的擴增產物的上游和下游各含有一個Index，這兩個Index作為該樣品的特異性標記，用于和其他待測序樣品進行區分；所述的ITS序列指ITS1-ITS4這一區域的核酸序列。

3.權利要求1和2任意一項所述的用于構建土壤樣品中真菌ITS序列多重測序文庫的PCR引物在真菌多樣性檢測中的應用。

4.權利要求1和2任意一項所述的用于構建土壤樣品中真菌ITS序列多重測序文庫的PCR引物在制備真菌多樣性檢測試劑盒中的應用。

5.一種ITS序列多重測序文庫構建試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包含權利要求1和2任意一項所述的用于構建土壤樣品中真菌ITS序列多重測序文庫的PCR引物。

6.權利要求5所述的一種ITS序列多重測序文庫構建試劑盒在土壤樣品真菌多樣性檢測中的應用。