[發明專利]一種免疫傳感器對黃曲霉毒素的檢測方法

有效

• 申請號: 201610615501.X
• 申請日: 2016-08-01
• 公開（公告）號: CN106324057B
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 石玲;劉衛;王澤鋒;陳顯蘭;楊光明;茍高章;徐世娟
• 申請（專利權）人: 紅河學院
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/416
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種免疫傳感器對黃曲霉毒素的檢測方法，其特征在于，該免疫傳感器對黃曲霉毒素的檢測方法包括：將制備的不同類型的納米材料修飾在金電極表面用于構建不同類型的電化學傳感器，采用交流阻抗法、循環伏安法檢測傳感器的電化學性能；黃曲霉毒素免疫傳感器的構建，先在金電極表面滴涂金/聚苯胺/石墨烯復合納米材料，晾干成膜后孵育anti-黃曲霉毒素，然后用牛血清蛋白溶液封閉非特異性活性位點，接著孵育一系列不同濃度的黃曲霉毒素抗原用于和抗體特異性識別，采用方波循環伏安法對黃曲霉毒素抗體的濃度和孵育時間進行條件優化、對緩沖溶液的pH和黃曲霉毒素抗原免疫反應時間進行優化，篩選最佳條件；

在最佳條件下采用交流阻抗法和方波循環伏安法，對不同濃度的黃曲霉毒素進行定量分析測定；滴涂金/聚苯胺/石墨烯制備方法包括：不同金負載率的滴涂金/聚苯胺/石墨烯復合納米材料的制備：準確量取10 mg 聚苯胺/石墨烯于燒杯中，超聲分散，分別加入10mg、40 mg HAuCl₄^.2H₂O和14.705 mg檸檬酸三鈉，加水至20 mL，超聲分散，逐滴加入冰浴的0.6 mL 0.1 mol/L NaBH₄攪拌12 h反應完全后，二次蒸餾水離心清洗，即可滴涂金/聚苯胺/石墨烯復合納米材料，備用；所述的滴涂金/聚苯胺/石墨烯復合納米材料的制備中還原劑有硼氫化鈉、抗壞血酸；所述的滴涂金/聚苯胺/石墨烯復合納米材料的制備中，反應原料中聚苯胺/石墨烯與氯金酸的質量比分別為1:1和1:4。

2.如權利要求1所述的免疫傳感器對黃曲霉毒素的檢測方法，其特征在于，黃曲霉毒素免疫傳感器的構建方法為：將拋光處理好的金電極在0.5M H₂SO₄中掃循環伏安直到電極穩定，晾干，在電極表面滴涂7μL 滴涂金/聚苯胺/石墨烯納米雜化物溶液，室溫晾干；用二次蒸餾水清洗，室溫下晾干成膜，在電極表面滴涂10 μL 150 μg/mL anti-黃曲霉毒素溶液，在37℃下孵育40 min；用二次蒸餾水清洗，繼續在電極表面滴涂10 μL 2.0%牛血清蛋白溶液封閉非特異性活性位點，于37℃下孵育40 min，清洗干凈；將一系列不同濃度的黃曲霉毒素抗原用于和抗體的特異性識別，37℃孵育30 min，二次蒸餾水清洗干凈，于4℃冰箱中存儲備用；黃曲霉毒素的濃度分別為0.025 ng/mL、0.05 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、15 ng/mL、20 ng/mL、25 ng/mL；對滴涂金/聚苯胺/石墨烯復合納米材料的表征包括：采用紫外光譜對制備的材料進行表征、采用透射電鏡對不同金納米粒子負載率的滴涂金/聚苯胺/石墨烯復合納米材料進行形貌表征。

3.如權利要求1所述的免疫傳感器對黃曲霉毒素的檢測方法，其特征在于，采用交流阻抗法、循環伏安法表征傳感器的電化學性能中，以Fe(CN)₆^3-/4-作為氧化還原探針，采用電化學交流阻抗法和循環伏安法，分析不同材料修飾電極在含有0.1 M KCl的10.0 mM Fe(CN)₆^3-/4-溶液中的循環伏安行為。