[發明專利]一種透明化試劑、生物組織透明化成像方法及其應用

有效

• 申請號: 201610613120.8
• 申請日: 2016-07-29
• 公開（公告）號: CN106323708B
• 公開（公告）日: 2019-04-30
• 發明（設計）人: 龔薇;斯科;祝欣培
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30;G01N21/64
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林超

1.一種透明化試劑，其特征在于：透明化試劑是山梨糖醇、尿素、甘油和去污劑溶于二甲基亞砜溶劑中形成的混合試劑；山梨糖醇、尿素、甘油和去污劑溶于二甲基亞砜的質量體積比分別是25％-35％、10％-30％、1％-5％、0％-5％。

2.權利要求1所述一種透明化試劑的應用，其特征在于：在離體生物組織透明化處理和離體生物組織成像中的應用。

3.一種生物組織透明化的成像方法，其特征在于所述方法包括以下步驟：

A)生物組織的固定和分離；

B)將生物組織浸泡在權利要求1所述的透明化試劑中，直到生物組織變得透明，透明化試劑采用權利要求1所述的透明化試劑；

C)對透明化的生物組織進行染色、制片和成像。

4.根據權利要求3所述的一種生物組織透明化的成像方法，其特征在于：所述步驟A中的生物組織為腦組織、胚胎、腎臟、脊柱、肝臟組織、腸道組織或者卵巢組織。

5.根據權利要求3所述的一種生物組織透明化的成像方法，其特征在于：所述步驟A中的生物組織來源于爬行類、鳥類和哺乳類動物生物體。

6.根據權利要求3所述的一種生物組織透明化的成像方法，其特征在于：所述步驟C中染色采用免疫熒光染色、免疫組織化學染色、化學染料染色和病毒感染表達熒光蛋白的方法。

7.根據權利要求3所述的一種生物組織透明化的成像方法，其特征在于：對于透明化自表達熒光蛋白的生物組織，不需要所述步驟C中生物組織染色步驟，而是直接進行制片和成像。

8.根據權利要求3所述的一種生物組織透明化的成像方法，其特征在于：所述步驟C中透明化生物組織的制片采用如下方法：先制備的回形模具，回形模具中部設有方形孔洞，外部為方形框架，厚度需與透明化的組織厚度相一致；然后將回形模具置于載玻片上，透明化的生物組織置于回形模具的方形孔洞中，在方形孔洞中加滿透明化試劑；最后將蓋玻片置于回形模具上，使方形孔洞密封。

9.根據權利要求3所述的一種生物組織透明化的成像方法，其特征在于：步驟C中所述的成像適用于多種光學顯微鏡，包括寬場熒光顯微鏡、激光片層掃描顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡和雙光子熒光顯微鏡。