[發明專利]抗口蹄疫O型病毒的單克隆抗體及抗體組合以及其在該病毒抗原、抗體檢測中的應用

有效

• 申請號: 201610586216.X
• 申請日: 2016-07-22
• 公開（公告）號: CN106279408B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 鄭金來;吳園園
• 申請（專利權）人: 北京標馳澤惠生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

本發明抗口蹄疫O型病毒的單克隆抗體及抗體組合以及其在該病毒抗原、抗體檢測中的應用，提出了口蹄疫O型病毒的非特異性單克隆抗體4H9anti及抗體組合，包括口蹄疫O型病毒的特異性單克隆抗體6D6anti和1F2anti及非特異性單克隆抗體2H10anti和非特異性單克隆抗體4H9anti。本發明可以實現對口蹄疫O型病毒抗原和抗體的檢測，且能快速檢出多種O型病毒毒株，用于檢測口蹄疫O型病毒具有較好的廣譜性，并具有高特異性、高靈敏度、快速檢測的特點，可用于口蹄疫O型病毒疫苗生產、相關產品質檢以及疫苗免疫效果的評價。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及口蹄疫O型病毒的單克隆抗體、分泌抗體的雜交瘤細胞株以及該抗體與其它抗體的組合與應用，該應用體現在通過對口蹄疫O型病毒的抗原和抗體檢測，實現疫苗生產過程中對原料、中間產品和成品的監控，以及口蹄疫O型疫苗免疫后血清抗體水平的監控。

背景技術

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)感染引起的偶蹄動物共患的傳染病。FMDV目前有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非口蹄疫病毒1、2、3型)和Asia1(亞洲1型)7個血清型。各型之間幾乎沒有免疫保護力，感染了一型口蹄疫的動物仍可感染另一型口蹄疫病毒而發病。近十幾年以來，全世界口蹄疫的流行態勢發生了一些新的變化。一方面未消滅口蹄疫的國家和地區，口蹄疫繼續流行，而另一方面已控制和消滅口蹄疫的國家和地區，也出現口蹄疫的發生和流行。從FAO/OIE口蹄疫參考實驗室報告的資料來看，在1990～2002年之間，口蹄疫在世界范圍內的流行還是非常嚴重的，7個型的口蹄疫均有流行，其中以O、A、和Asia1型的流行較為嚴重。

FMDV屬于微核糖核酸病毒科(picornaviridae)口蹄疫病毒屬(aphthavirus)的成員。感染FMDV的細胞培養液，電鏡下觀察，有四種粒子。最大粒子為完整病毒，直徑23±2nm，沉降系數為146S，具有感染性，呈圓形或六角形，正二十面體對稱，分子量6.9×10⁶Da，無囊膜，在氯化艷中的浮密度為1.43g/ml。病毒由中央的核糖核酸核芯和周圍的蛋白殼體所組成，成熟病毒粒子約含30％的RNA，其余70％為蛋白質。第二種為不含有RNA的空衣殼，直徑21nm，沉降系數為75S，沒有感染性，有型特異性和免疫原性；第三種為衣殼蛋白亞單位，其直徑為7nm，沉降系數為12S～14S，無RNA，無感染性，有抗原性；第四種為病毒感染相關抗原(Virus infection-associated antigen，VIA抗原)，沉降系數為4.5S，為病毒的非結構蛋白(病毒RNA聚合酶)，能誘發動物產生群特異抗體，無型特異性，在瓊脂擴散試驗中對各型口蹄疫病毒的抗體都呈現反應，可以應用VIA抗原檢測各型口蹄疫病毒感染動物的血清抗體。

目前，口蹄疫病毒在全世界主要有7個血清型，以及65個以上亞型。各型之間幾乎沒有免疫保護力，感染了一型口蹄疫的動物仍可感染另一型口蹄疫病毒而發病，因此常常用多價疫苗來降低患口蹄疫的風險。O型口蹄疫為全世界流行最廣的一個血 清型，我國流行的口蹄疫主要為O、A、C三型及ZB型(云南保山型)。口蹄疫O型包含多種毒株：O/GX/09-7、O/Mya98/XJ/2010、O/Mya98/BY/2010、O/JMS/2000、OZK/93等。

目前，口蹄疫滅活疫苗是預防該病發生的主要有效手段，主要通過將口蹄疫病毒體外培養后、滅活，然后與乳化劑混合制成免疫疫苗。為保證免疫效果，很多疫苗生產商將口蹄疫多種毒株混合在一起制成多價或多組分疫苗，比如金宇保靈生物藥品有限公司生產的口蹄疫三價疫苗中包含口蹄疫O型(O/Mya98/BY/2010)、口蹄疫A型(Re-A/WH/09)和口蹄疫亞洲1型(JSL/06)三種毒株。

FMDV的免疫是依賴T細胞的B細胞應答，疫苗接種主要誘導中和抗體的產生。疫苗接種是特異性預防FMDV的可靠和有效手段，安全有效的疫苗是成功預防、控制乃至最終消滅FMDV的先決條件。FMDV弱毒疫苗和滅活疫苗等常規疫苗都具有良好的免疫原性，在預防和控制FMDV的過程中發揮著重要作用。