[發明專利]一種誘導杜鵑蘭原球莖芽簇增殖的方法

有效

• 申請號: 201610578050.7
• 申請日: 2016-07-21
• 公開（公告）號: CN106171998B
• 公開（公告）日: 2018-10-19
• 發明（設計）人: 張明生;吳彥秋;呂享;葉睿華;李小蘭
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 李余江;程新敏

1.一種誘導杜鵑蘭原球莖芽簇增殖的方法，其特征在于：以種子萌發的原球莖為外植體，經組織培養誘導芽簇增殖與分化出苗，并通過生根培養、煉苗移栽后獲得健壯的杜鵑蘭植株；

具體步驟如下：

步驟1：采用人工授粉獲得的杜鵑蘭種子接種于培養基中進行培養，萌發獲得的原球莖作為組織培養的外植體；

步驟2：將步驟1中的外植體接種于原球莖增殖培養基上進行原球莖增殖培養直至原球莖顏色由白色轉為黃綠色，形成簇狀原球莖且表面有白色毛狀物；

步驟3：挑選步驟2中生長健壯的原球莖接種于芽簇誘導培養基上進行芽簇誘導培養誘導原球莖形成芽簇；

步驟4：將步驟3中的芽簇分割成兩部分，一部分是芽簇中未分化的原球莖，將其接入步驟3中芽簇誘導培養基中繼續誘導芽簇形成；另一部分是基部明顯膨大且具有分化成苗趨勢的原球莖，將其接入生根培養基上進行生根培養直至長出3～5條長為2～3cm根的健壯杜鵑蘭幼苗；

步驟5：將步驟4中成功誘導生根的健壯杜鵑蘭幼苗轉至煉苗室，3～5d后，打開封口膜取出幼苗，洗凈幼苗根上附著的培養基，并吸干水分，然后用800倍多菌靈溶液浸泡其根5min，移栽到苗床上，噴水保濕，2個月后移栽上盆，獲得生長健壯的杜鵑蘭植株；

步驟1中的培養基為KC+NAA0.7mg·L^-1+6-BA 1.5mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+活性炭0.5g·L^-1+土豆汁75g·L^-1；

步驟2中的原球莖增殖培養基為1/2MS+6-BA 1.0mg·L^-1+IBA 1.0mg·L^-1+活性炭0.5g·L^-1+蔗糖30g·L^-1+瓊脂5.5g·L^-1；

步驟3中的芽簇誘導培養基為以不含蔗糖的1/4MS、1/2MS或MS為基本培養基，分別添加TDZ 1.5～2.5mg·L^-1+NAA0.1～0.3mg·L^-1+蔗糖10～30g·L^-1+瓊脂5.5g·L^-1；

步驟4中的生根培養基為1/4MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1+活性炭0.5g·L^-1+蔗糖30g·L^-1+瓊脂5.5g·L^-1。

2.根據權利要求1所述的誘導杜鵑蘭原球莖芽簇增殖的方法，其特征在于：步驟3的芽簇誘導培養基為1/4MS+TDZ 1.5mg·L^-1+NAA0.3mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+瓊脂5.5g·L^-1。