[發(fā)明專(zhuān)利]一種南極磷蝦中吡咯并[1,2?a]吡嗪?1,4?二酮,六氫?3?(2?甲基丙基)的提取純化及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610570448.6
• 申請(qǐng)日: 2016-07-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106279180B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王翩翩;劉代成
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東師范大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07D487/04
• 分類(lèi)號(hào): C07D487/04;G01N30/02
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司37221
• 代理人: 趙妍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種南極磷蝦中吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氫-3-(2-甲基丙基)的提取純化及檢測(cè)方法，屬食品、藥品和化工領(lǐng)域。

背景技術(shù)

南極磷蝦(Euphausia superba Dana)，隸屬節(jié)肢動(dòng)物門(mén)、甲殼綱、磷蝦目，體型較小，一般體長(zhǎng)約5.5～6.0cm，體重約2g左右。南極生物種類(lèi)較少，但數(shù)量龐大，食物鏈也相對(duì)簡(jiǎn)單。以浮游植物為食的南極磷蝦是鯨、海豹、企鵝等肉食動(dòng)物的主要食物，也是南極食物鏈中的基礎(chǔ)。南極磷蝦是地球上數(shù)量最大繁衍最成功的單種生物資源之一，其生物蘊(yùn)藏量約為6.5×10⁸～10×10⁸噸，最新估算量為3.79×10⁸噸。南極磷蝦營(yíng)養(yǎng)豐富，富含活性物質(zhì)。南極磷蝦蛋白及酶類(lèi)、蝦青素、甲殼素等均已有研究報(bào)道。隨著南極磷蝦研究的深入，南極磷蝦產(chǎn)品也由初級(jí)的飼料、蝦粉等向高端的保健、醫(yī)藥領(lǐng)域發(fā)展。加快南極磷蝦研究進(jìn)度有利于提高我國(guó)在南極磷蝦產(chǎn)業(yè)方面占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位。

吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氫-3-(2-甲基丙基)即：Cyclo(Pro-Leu)，是一種環(huán)二肽類(lèi)物質(zhì)，具有較高的生物活性，主要來(lái)存在于蛋白及多肽水解物，以及動(dòng)植物、酵母、原生生物、真菌、海洋生物。目前，尚未有從南極磷蝦中發(fā)現(xiàn)有Cyclo(Pro-Leu)的研究報(bào)道。因此研究南極磷蝦中是否含有Cyclo(Pro-Leu)及其提取純化和檢測(cè)方法，對(duì)南極磷蝦資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種南極磷蝦中吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮，六氫-3-(2-甲基丙基)的提取純化及檢測(cè)方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

一種南極磷蝦中吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氫-3-(2-甲基丙基)的提取純化方法，步驟如下：

(1)向南極磷蝦中加入甲醇進(jìn)行回流提取，過(guò)濾，得濾液；濾液蒸發(fā)濃縮得甲醇膏；

(2)向步驟(1)的甲醇膏中加入乙醚浸提，過(guò)濾得乙醚液；乙醚液蒸發(fā)后得乙醚浸膏；

(3)步驟(2)的乙醚浸膏加入適量乙醚溶解后，得乙醚浸膏液，再向其中加入硫酸水溶液攪拌萃取，萃取得酸水層；

(4)向步驟(3)所得酸水層中加入氯仿進(jìn)行萃取，靜置分液得氯仿層A；

(5)向步驟(4)所得氯仿層A中加入氫氧化鈉水溶液萃取，靜置分液得堿水層和氯仿層B；

(6)將步驟(5)所得堿水層中加入適量NH₄Cl，使得溶液pH調(diào)節(jié)至7-8，再加入等體積氯仿進(jìn)行攪拌萃取，靜置分液得氯仿層C；

(7)氯仿層C蒸發(fā)濃縮得Cyclo(Pro-Leu)樣品。

步驟(1)中，南極磷蝦在加入甲醇前先經(jīng)過(guò)冷凍干燥處理。由于南極磷蝦體內(nèi)的酶具有很高的活性，南極磷蝦被捕撈后，其體內(nèi)的內(nèi)源消化酶能高活性的降解蛋白質(zhì)，使死亡后的組織快速分解，加速了南極磷蝦的自溶、腐敗和變質(zhì)；通過(guò)對(duì)南極磷蝦進(jìn)行冷凍干燥預(yù)處理，能夠防止南極磷蝦自溶，有效的保持南極磷蝦的品質(zhì)，進(jìn)而更加有利于提取Cyclo(Pro-Leu)。

步驟(1)中，所述南極磷蝦與甲醇加入量的比為1g:(6-10)mL，提取溫度為70～85℃，優(yōu)選80℃，甲醇回流提取的次數(shù)為7-9次，每次提取的時(shí)間為1-2h，優(yōu)選1h。甲醇提取的次數(shù)選為7-9次，能夠盡可能多的分離提取出Cyclo(Pro-Leu)。

步驟(2)中，所述甲醇膏與乙醚加入量的比為1g:(4-6)mL，加入乙醚浸提的次數(shù)為4-6次，每次提取的時(shí)間為0.5-1h，優(yōu)選1h；乙醚的提取次數(shù)選為4-6次，不僅有效分離出南極磷蝦中的Cyclo(Pro-Leu)，還能盡量減少提取次數(shù)的增加所帶來(lái)的能源浪費(fèi)。

步驟(3)中，所述乙醚浸膏與乙醚加入量的質(zhì)量體積比為1g:10mL，加入乙醚可以增加與酸水的接觸面積，保證堿性物質(zhì)充分溶于酸水層。

步驟(3)中，所述乙醚浸膏液與硫酸水溶液加入量的體積比為1：(10-30)；所述硫酸水溶液的體積分?jǐn)?shù)為1～3％，優(yōu)選2％，選擇所述濃度的硫酸水溶液既能保證足夠的酸性以去除酸性雜質(zhì)，又防止硫酸濃度過(guò)高引起目的物的氧化分解。

步驟(4)中，所述酸水層與氯仿體積比為1：1；所述氯仿與酸水層攪拌萃取次數(shù)為3-4次，每次攪拌時(shí)間為0.5～1.5h，優(yōu)選的，攪拌時(shí)間為1h；充分使二者混勻能夠盡可能使弱堿性成分溶于氯仿層。