[發(fā)明專利]一種南極磷蝦DTDP的提取純化及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610569991.4
• 申請日: 2016-07-19
• 公開（公告）號: CN106279179B
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王翩翩;劉代成
• 申請（專利權(quán)）人: 山東師范大學(xué)
• 主分類號: C07D487/04
• 分類號: C07D487/04;G01N30/02
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司37221
• 代理人: 董潔

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種南極磷蝦5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氫-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1’,2’-d]吡嗪的提取純化及檢測方法，屬食品、藥品和化工領(lǐng)域。

背景技術(shù)

南極磷蝦(Euphausia superba Dana)，隸屬節(jié)肢動物門、甲殼綱、磷蝦目，體型較小，一般體長約5.5～6.0cm，體重約2g左右。南極生物種類較少，但數(shù)量龐大，食物鏈也相對簡單。以浮游植物為食的南極磷蝦是鯨、海豹、企鵝等肉食動物的主要食物，也是南極食物鏈中的基礎(chǔ)。南極磷蝦是地球上數(shù)量最大繁衍最成功的單種生物資源之一，其生物蘊(yùn)藏量約為6.5×10⁸～10×10⁸噸，最新估算量為3.79×10⁸噸。在糧食短缺，世界漁業(yè)資源萎縮，尤其是中國近海漁業(yè)開發(fā)過度的情況下，南極磷蝦無疑是一種具有巨大開發(fā)潛力的境外漁業(yè)資源。南極磷蝦營養(yǎng)豐富，富含活性物質(zhì)。南極磷蝦蛋白及酶類、蝦青素、甲殼素等均已有研究報道。隨著南極磷蝦研究的深入，南極磷蝦產(chǎn)品也由初級的飼料蝦粉等向高端的保健、醫(yī)藥領(lǐng)域發(fā)展。加快南極磷蝦研究進(jìn)度有利于我國在南極磷蝦產(chǎn)業(yè)方面占據(jù)優(yōu)勢地位。

5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氫-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1’,2’-d]吡嗪(5,10-diethoxy-2,3,7,8-tetrahydro-1H,6H-dipyrrolo[1,2-a；1′,2′-d]pyrazine,簡稱DTDP)具有明顯的抗炎、抗腫瘤等作用，多發(fā)現(xiàn)于微生物中，蠐螬、茶葉等也含有DTDP。目前世界上還未有南極磷蝦DTDP的研究報道。因此研究南極磷蝦中是否含有DTDP以及它的提取和檢測方法，這對南極磷蝦的活性物質(zhì)開發(fā)，提高其附加值具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種南極磷蝦5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氫-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪的提取純化方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

一種南極磷蝦5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氫-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪的提取純化方法，步驟如下：

(1)將南極磷蝦與甲醇接觸而進(jìn)行提取，過濾，得濾液；濾液蒸發(fā)濃縮得到甲醇膏；

(2)將步驟(1)中的甲醇膏與乙醚接觸而進(jìn)行浸提，過濾，得乙醚液；乙醚液蒸發(fā)后得到乙醚浸膏；

(3)將步驟(2)中的乙醚浸膏與乙醚接觸而進(jìn)行溶解，得乙醚浸膏液，使其與酸水溶液接觸而進(jìn)行萃取，萃取得到酸水相；

(4)將步驟(3)中的酸水相與氯仿接觸而進(jìn)行萃取，分離得到氯仿層A；

(5)將步驟(4)中的氯仿層A與氫氧化鈉水溶液接觸而進(jìn)行萃取，分離得到堿水層和氯仿層B；

(6)將步驟(5)中的氯仿層B蒸發(fā)除去溶劑，得到預(yù)提取物，使其與石油醚接觸而進(jìn)行浸溶，過濾得到石油醚浸提液；

(7)將步驟(6)中的石油醚浸提液蒸發(fā)除去溶劑，得到5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氫-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪。

步驟(1)中，南極磷蝦在接觸甲醇提取前先經(jīng)過冷凍干燥處理。由于南極磷蝦體內(nèi)的酶具有很高的活性，南極磷蝦被捕撈后，其體內(nèi)的內(nèi)源消化酶能高活性的降解蛋白質(zhì)，使死亡后的組織快速分解，加速了南極磷蝦的自溶、腐敗和變質(zhì)；通過對南極磷蝦進(jìn)行冷凍干燥預(yù)處理，能夠防止南極磷蝦自溶，有效的保持南極磷蝦的品質(zhì)，從而可以有效提取5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氫-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪。

步驟(1)中，所述南極磷蝦與甲醇加入量的比為1g:(6-10)mL，提取溫度為75～85℃，優(yōu)選80℃，甲醇提取的次數(shù)為7-9次，每次浸提的時間為1-2h，提取方式可以為回流提取或攪拌提取。甲醇回流提取的次數(shù)選為7-9次，能夠盡可能多的分離提取出5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氫-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪。

步驟(2)中，所述甲醇膏與乙醚加入量的比為1g:(4-6)mL，加入乙醚浸提的次數(shù)為4-6次，每次浸提的時間為0.5-1h。乙醚的提取次數(shù)選為4-6次，不僅有效分離出南極磷蝦中的5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氫-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1′,2′-d]吡嗪，還能盡量減少提取次數(shù)的增加所帶來的能源浪費(fèi)。