[發明專利]一種檢測母乳中低聚糖的方法

有效

• 申請號: 201610556457.X
• 申請日: 2016-07-14
• 公開（公告）號: CN107621399B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發明（設計）人: 陳歷俊;趙軍英;魏京華;姜鐵民;董學艷;李菊芳;張毅
• 申請（專利權）人: 北京三元食品股份有限公司
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34;G01N1/40;G01N30/14;G01N30/02
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種檢測母乳中低聚糖的方法，其特征在于：對母乳樣品進行前處理，采用液質法對前處理后的母乳中的低聚糖進行定性和定量分析，所述前處理具體為：在2-8℃，2000-6000g條件下離心所述母乳樣品5-30min，除去上層物質，取下層液體并加入相當于下層液體體積1.5-2.5倍的乙醇水溶液，于﹣70℃~﹣90℃冷凍5-15min后，于10000-15000rpm離心10-50min，取上清液，即得；

其中，液相采用Hypercarb多孔石墨碳色譜柱，以甲酸-乙腈-水為流動相A相；甲酸-乙腈-水為流動相 B相，按0min 100%A，10-30min 84%A，20-40min 100%B，30-50min 100A%的條件進行梯度洗脫；所述流動相A相中，甲酸的體積百分數為0.05%-0.15%，乙腈的體積百分數為2%-4%；所述流動相 B相中，甲酸的體積百分數為0.05-0.15%，乙腈的體積百分數為85%-95%；

所述定性分析的低聚糖包括2’-巖藻乳糖，6’-唾液乳糖，3’-巖藻乳糖，乳糖二巖藻四糖，唾液酰-N-乙酰氨基乳糖，乳糖-N-四糖/乳糖-N-新四糖，乳糖-N-巖藻戊糖II，唾液乳糖-N-新四糖，乳糖-N-二巖藻己糖I，乳糖-N-己糖，巖藻-唾液乳糖-N-新四糖，巖藻糖基-對-乳-N-己糖 IV，唾液乳糖-N-己糖，二巖藻基-對-乳-N-己糖，巖藻乳糖-N-八糖，二巖藻-唾液乳糖基-N-新己糖，巖藻-唾液乳糖基-N-八糖，三巖藻糖-異乳糖基-N-八糖。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述乙醇水溶液為體積分數60-70%的乙醇水溶液。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，

所述流動相A相為0.1%甲酸-3%乙腈-水；流動相B相為0.1%甲酸-90%乙腈-水。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：質譜采用Q Exactive檢測器。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，質譜包括如下參數：采用可加熱電噴霧離子源，正離子全掃模式。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，質譜還包括如下參數：

S型透鏡射頻50-70V；和/或，毛細管溫度300-350℃；和/或，噴霧電壓3-4kV；和/或，加熱溫度300-400℃；和/或，掃描范圍150-2000m/z。

7.根據權利要求4或5或6所述的方法，其特征在于，所述定量分析包括如下步驟：

（1）制備待測樣品溶液：取母乳樣品，離心除去上層脂肪，取下層液體并加入醇類溶劑，于﹣70℃~﹣90℃冷凍5-15min后，離心，取上清液，即得；

（2）制備標準品溶液：將低聚糖標準品溶于水中，配制3-8個不同濃度梯度的標準品溶液；

（3）繪制標準工作曲線：采用液質法對步驟（2）的標準品溶液進行檢測，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線；

（4）定量分析：采用與步驟（3）相同的液質條件對待測樣品溶液進行檢測，根據標準工作曲線，計算低聚糖的含量。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：2’-巖藻乳糖標準工作曲線的線性范圍為0.5-20mg/mL，6’-唾液乳糖標準工作曲線的線性范圍為0.5-50mg/mL，3’-巖藻乳糖標準工作曲線的線性范圍為0.5-20mg/mL。