[發明專利]LIGHT作為免疫佐劑制備重組病毒疫苗

在審

• 申請號: 201610552226.1
• 申請日: 2016-07-13
• 公開（公告）號: CN107617104A
• 公開（公告）日: 2018-01-23
• 發明（設計）人: 王蒲;鄒軍輝;盧曉華;鄭威;趙琦
• 申請（專利權）人: 中國科學院深圳先進技術研究院
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/245;A61K39/12;A61K48/00;A61P31/20;A61P31/22;A61P37/04
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司11127
• 代理人: 韓蕾,姚亮

技術領域

本發明屬于疫苗領域，涉及LIGHT作為免疫佐劑制備重組病毒疫苗，具體而言，本發明涉及LIGHT作為免疫佐劑在制備EBV和HPV的重組病毒疫苗中的應用以及所制備的重組病毒疫苗。

背景技術

免疫佐劑簡稱佐劑，是免疫增強劑，當與抗原一起注射或預先注入機體時，可增強機體對抗原的免疫應答或改變免疫應答類型。佐劑主要通過以下作用機制發揮免疫增強作用：1)延緩抗原的降解和排除，提高抗原的半衰期，更有效刺激免疫系統；2)刺激巨噬細胞和樹突狀細胞(DC)，增強其處理和抗原提呈的能力；3)刺激淋巴細胞的增殖和分化，提高機體初次和再次免疫應答的抗體滴度；4)改變抗體的產生類型以及產生遲發型變態反應。佐劑主要可分為兩種：一種本身具有免疫原性。如結核分支桿菌和百日咳桿菌等；另一種本身無免疫原性，如氫氧化鋁、礦物油乳劑和表面活性劑等。

隨著生命科學基礎理論的發展，尤其是免疫學、病毒學、傳染病學和基因工程技術的不斷發展，現代疫苗學研究日新月異。科學研究的深入，新型疫苗的開發，迫切需求新型免疫佐劑。新型疫苗主要由基因工程重組抗原或化學合成多肽組成，但存在抗原遞呈和抗原表達及疫苗免疫反應性弱等問題，急需新型免疫佐劑的研究。并且，新型免疫佐劑不僅要求安全性高、打破機體免疫耐受，刺激更強地體液和細胞免疫應答，更要切合新型疫苗，如粘膜疫苗、DNA疫苗和腫瘤治療性疫苗。目前已開發的新型免疫佐劑，如細胞因子白介素1、2和12、CpG寡脫氧核苷酸(CpG-ODN)、脂質體佐劑和熱休克蛋白佐劑等，均是直接增強機體免疫應答；而現今多種病毒性疾病和腫瘤，都是機體免疫抑制信號通路活化，導致T淋巴細胞活化受抑制，從而產生免疫耐受，使機體對病毒感染無應答或弱的免疫反應。如何增強疫苗的免疫原性、克服病毒及病毒感染細胞的免疫逃逸、誘導細胞免疫、提高疫苗的安全性和特異性等是疫苗研究的核心和難點問題。

發明內容

為了解決上述存在的技術問題，本發明的目的在于將疫苗和免疫調節相結合，具體提供LIGHT作為免疫佐劑在制備EBV和HPV的重組病毒疫苗中的應用。

本發明還提供pcDNA3.1(+)-LIGHT質粒作為免疫佐劑制備的重組病毒DNA疫苗；

本發明還提供LIGHT蛋白作為免疫佐劑制備的重組病毒蛋白疫苗，旨在為開發更高效病毒疾病和腫瘤的預防和治療性疫苗奠定基礎。

本發明的目的通過以下技術方案得以實現：

本發明提供LIGHT作為免疫佐劑在制備EBV和HPV的重組病毒疫苗中的應用。

上述應用中，優選地，所述LIGHT包括LIGHT基因、LIGHT蛋白、和/或pcDNA3.1(+)-LIGHT質粒；所述重組病毒疫苗為重組EBV疫苗或重組HPV疫苗。

上述應用中，優選地，LIGHT作為免疫佐劑增強疫苗刺激機體產生抗體、誘發機體產生體液免疫應答、刺激機體產生細胞免疫應答的能力。

本發明還提供LIGHT作為免疫佐劑制備的重組病毒疫苗，所述LIGHT包括pcDNA3.1(+)-LIGHT質粒和/或LIGHT蛋白；所述重組病毒疫苗包括重組病毒DNA疫苗和/或重組病毒蛋白疫苗；所述重組病毒DNA疫苗由pcDNA3.1(+)-LIGHT質粒聯合病毒DNA疫苗獲得；所述重組病毒蛋白疫苗由LIGHT蛋白聯合病毒蛋白疫苗獲得。

本發明還提供一種重組病毒DNA疫苗，其采用上述pcDNA3.1(+)-LIGHT質粒作為免疫佐劑，其是按照包括以下步驟的制備方法制備得到的：

利用LIGHT基因與pcDNA3.1(+)質粒構建重組表達載體pcDNA3.1(+)-LIGHT質粒；

pcDNA3.1(+)-LIGHT質粒與病毒DNA疫苗聯合獲得重組病毒DNA疫苗。根據實際操作，所述pcDNA3.1(+)-LIGHT質粒與所述病毒DNA疫苗質量比例可以根據個體差異等因素進行適當調整，優選為1:1-10:1。

上述重組病毒DNA疫苗中，優選地，所述病毒DNA疫苗包括EBV DNA疫苗和/或HPV DAN疫苗。

上述重組病毒DNA疫苗中，優選地，構建重組表達載體pcDNA3.1(+)-LIGHT質粒的步驟為：

PCR擴增LIGHT基因并與pcDNA3.1(+)質粒進行雙酶切；

酶切后的LIGHT基因與pcDNA3.1(+)質粒連接；

連接后的產物轉化宿主細胞，培養宿主細胞，篩選并酶切鑒定，獲得陽性克隆重組表達載體pcDNA3.1(+)-LIGHT質粒。