[發明專利]一種烤煙SSR核心引物組合及其構建方法有效
| 申請號： | 201610547721.3 | 申請日： | 2016-06-29 |
| 公開（公告）號： | CN107541568B | 公開（公告）日： | 2023-03-31 |
| 發明（設計）人： | 楊愛國;任民;程立銳;馬冰;程亞增;代帥帥;蔣彩虹;劉旦;耿銳梅;王元英 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院煙草研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京市盛峰律師事務所 11337 | 代理人： | 于國富 |
| 地址： | 266101 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 烤煙 ssr 核心 引物 組合 及其 構建 方法 | ||
1.一種烤煙SSR核心引物組合物，其特征在于，所述的烤煙SSR核心引物組合物由以下24對引物組成：
PT52573，其由TGATCCGTTTGGAGAAGTCA所示的DNA堿基
和GGCGAAATTAGAAATTGTATCTCAA所示的DNA堿基組成；
PT60795，其由ATGAAACTTTCGCATGGCTC所示的DNA堿基
和GCCAGCCAGGTGACAATAAT所示的DNA堿基組成；
PT53936，其由CTTGTACCATCTCAAATGACCC所示的DNA堿基
和GCAAGAGGTTCAGTTAACACCC所示的DNA堿基組成；
PT60629，其由TGCACTCACAGACGAACACA所示的DNA堿基
和TGTATGATGTTCCAGGCGAA所示的DNA堿基組成；
PT50244，其由CAATGATGGAAATGAAATCCAA所示的DNA堿基
和AGTTCCATTTCAAGGTGGGA所示的DNA堿基組成；
PT60698，其由CTTGTTCCTCTCACATCGGG所示的DNA堿基
和TAACAATCACTTGGCGAGGG所示的DNA堿基組成；
PT60038，其由CATCACCTTTCTCATTTCCACA所示的DNA堿基
和GCTGACAAGTGATGATTCTACCA所示的DNA堿基組成；
PT60435，其由AACCGAAACAAGGGAACAGA所示的DNA堿基
和GGGTATAGTAAATATCATGTGTTGCG所示的DNA堿基組成；
PT50501，其由ATGAAGGCTCCATCAACGAC所示的DNA堿基
和AACTAAATGCACTAATCATGGAAA所示的DNA堿基組成；
PT50176，其由TGTCATGTTAGCATTCTTTGGC所示的DNA堿基
和CGGCTTTCCTCCTCTCTTTC所示的DNA堿基組成；
PT51144，其由ACCGACAACACACGATTGTA所示的DNA堿基
和GCTTGTCGCTTAGCTTAACCAT所示的DNA堿基組成；
PT30046，其由GATAGGTAGATTATCCTCTGCAACA所示的DNA堿基
和GGTGCTAGCAACATCATCAAA所示的DNA堿基組成；
PT61010，其由TCAATTCCCTTCTGCCTTTG所示的DNA堿基
和GGAAGTGTTGGGAATTAGTAGAGC所示的DNA堿基組成；
PT53568，其由CGTTTCTCTTCCAATTAACAGC所示的DNA堿基
和ACGTCATCAATGGCATCAAA所示的DNA堿基組成；
PT51975，其由CCACAAACTATCTGGTGTCCC所示的DNA堿基
和CACCACGAATAAGCTAGTTACAAA所示的DNA堿基組成；
PT30272，其由GAACCTAACCTCGCTCCACA所示的DNA堿基
和AAATGGTAGCTGCGAGGAGA所示的DNA堿基組成；
PT30302，其由CCTTCCTAACCTCAGCTGGAA所示的DNA堿基
和TATGCCAATGCTTCTTGTGG所示的DNA堿基組成；
PT50693，其由TCATGAGAGGCAGACAGTGTT所示的DNA堿基
和TTGTGATGTTGTAATCCTGTTGG所示的DNA堿基組成；
PT53384，其由CAACCGCAAGAGATCCTTCT所示的DNA堿基
和CGAAAGAGACAGTCGCAAGA所示的DNA堿基組成；
PT53519，其由GCTTGGCATCATCAGAATTT所示的DNA堿基
和TATTTCCATTGGCCGTGTCT所示的DNA堿基組成；
PT50298，其由CCACAGCATGTAGACAACGG所示的DNA堿基
和AGTCGAAGTTCAAACAGTTGGT所示的DNA堿基組成；
PT54196，其由CCTATGTTTGGAGCAGAGGG所示的DNA堿基
和GTCATTGTCTGTGCATGGCT所示的DNA堿基組成；
PT50472，其由TCCAACACAGAATATTTATACGAAGG所示的DNA堿基
和AAGAGCACCTCTTGAGACTATTAAA所示的DNA堿基組成；
PT30132，其由CCTAACAGCATTTGCTACCCA所示的DNA堿基
和GATGGACAAGAGTGGCCTTT所示的DNA堿基組成。
2.一種權利要求1所述的烤煙SSR核心引物組合物的構建方法，其特征在于，該方法包括：
步驟一、采用CTAB方法提取烤煙種質基因組DNA；
步驟二、利用已經公布的2317對引物在中國種質凈葉黃、小黃金1025、革新3號和2份美國引進種質NC82、Speight G-140中進行PCR擴增，初步篩選出70對核心引物，初步篩選出的70對核心引物，在20份代表煙草種質進行進一步PCR擴增，利用20份烤煙種質對獲得的初篩獲得的引物進行復篩和驗證，最終確定權利要求1所述的烤煙SSR核心引物組合物；
所述初步篩選獲得的70對SSR標記為：
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