[發明專利]一種紅外線?固定化酶協同酶解蛋白質的方法

在審

• 申請號: 201610537865.0
• 申請日: 2016-07-08
• 公開（公告）號: CN107586816A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 王玉霞;馬光輝;賴恩平;周煒清;韋祎
• 申請（專利權）人: 中國科學院過程工程研究所
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12N11/08
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司11332
• 代理人: 鞏克棟,侯桂麗

1.一種蛋白質酶解的方法，其特征在于，其包括：在紅外線輻射下利用溫敏固定化酶微球對蛋白質進行酶解。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，其包括以下步驟：

(1)將待酶解的蛋白質樣品進行熱變性處理；

(2)在紅外線輻射下，采用溫敏固定化酶微球對步驟(1)得到的溶液進行酶解反應，當反應溶液的溫度升至45-65℃時，關閉紅外線；

(3)將反應溶液的溫度降至5-25℃，終止酶解反應，分離溫敏固定化酶微球與酶解產物溶液，收集酶解產物溶液。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述紅外線的功率為50-400W，波長為2.5-20μm；

優選地，所述溫敏固定化酶微球的載體材料是由N-異丙基丙烯酰胺與丙烯酸或甲基丙烯酸通過共聚反應形成的，優選由N-異丙基丙烯酰胺與丙烯酸通過共聚反應形成；

優選地，所述溫敏固定化酶微球的固定化酶為固定化胰蛋白酶或固定化糜蛋白酶，優選為固定化胰蛋白酶。

4.如權利要求1-3之一所述的方法，其特征在于，所述溫敏固定化酶微球的粒徑為0.5-200μm，優選為1-100μm，更優選為1-50μm；

優選地，所述溫敏固定化酶微球的臨界相轉變溫度為32-45℃，優選為33-43℃，更優選為35-40℃。

5.如權利要求2-4之一所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述熱變性處理前還包括：將待酶解的蛋白質樣品溶解于堿性溶液中；

優選地，所述堿性溶液選自碳酸氫銨緩沖液、Tris-HCl緩沖液或尿素溶液中的任意一種，優選為尿素溶液；

優選地，所述堿性溶液的摩爾濃度為50-200mmol/L。

6.如權利要求2-5之一所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述熱變性處理過程為：在紅外線輻射下，于85-95℃水浴變性1-5min；

優選地，步驟(1)所述待酶解的蛋白質樣品體積為1-20mL，優選為1-10mL。

7.如權利要求2-6之一所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述酶解反應中酶與待測蛋白質樣品的質量比為1:1-1:40，優選為1:1-1:20；

優選地，所述待測蛋白質樣品的質量濃度為100ng/mL-5mg/mL，優選為0.1μg/mL-1mg/mL；

優選地，所述反應溶液的體積為1-50mL；

優選地，所述酶解反應的時間為0.5-5min。

8.如權利要求2-7之一所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述終止酶解反應的溫度為5-25℃，優選為5-20℃，更優選為5-10℃。

9.如權利要求1-8之一所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)將待酶解的蛋白質樣品在紅外線輻射下，于85-95℃水浴變性1-5min；

(2)在紅外線輻射下，采用溫敏固定化酶微球對步驟(1)得到溶液進行酶解反應，當反應溶液的溫度升至45-65℃時，關閉紅外線；所述酶解反應中酶與待測蛋白質樣品的質量比為1:1-1:40；

(3)將反應溶液的溫度降至5-25℃，終止酶解反應，分離溫敏固定化酶微球與酶解產物溶液，收集酶解產物溶液。

10.紅外線-溫敏固定化酶微球在蛋白質酶解中的用途，其特征在于，在紅外線輻射下利用溫敏固定化酶微球對蛋白質進行酶解；

優選地，所述溫敏固定化酶微球的載體材料是由N-異丙基丙烯酰胺與丙烯酸或甲基丙烯酸通過共聚反應形成的，優選由N-異丙基丙烯酰胺與丙烯酸通過共聚反應形成；

優選地，所述溫敏固定化酶微球的固定化酶為固定化胰蛋白酶或固定化糜蛋白酶，優選為固定化胰蛋白酶。