[發明專利]替度魯肽串聯多肽及替度魯肽制備方法

有效

• 申請號: 201610537328.6
• 申請日: 2016-07-08
• 公開（公告）號: CN107586330B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 許俊;路建光;黃宗慶;姜旖旎;郭新昆
• 申請（專利權）人: 上海多米瑞生物技術有限公司;上海醫藥工業研究院
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/26;A61P1/00
• 代理公司: 上海衡方知識產權代理有限公司 31234
• 代理人: 卞孜真;周世亮

本發明提供了一種替度魯肽串聯多肽，所述替度魯肽串聯多肽包含兩個或更多個替度魯肽多肽通過接頭肽連接而成，在接頭處包含酸切和酶切位點。本發明還提供了包含所述替度魯肽串聯多肽序列的質粒及宿主細胞，以及使用所述替度魯肽串聯多肽制備替度魯肽的方法。

技術領域

本發明涉及替度魯肽串聯多肽，包含所述替度魯肽串聯多肽序列的質粒及宿主細胞，以及制備替度魯肽的方法。

背景技術

GLP-2由33個氨基酸組成，是胰高血糖素原經過酶切得到的激素，可減少胃排空和分泌，并調節小腸內膜細胞的生長、增殖和修復，用于治療短腸綜合癥。但是天然的GLP-2半衰期短，易被DPPIV水解。替度魯肽是GLP-2的N端Ala²被替代成Gly²，丙氨酸被替代以后，使得半衰期延長。

中國專利CN1244872A公布了替度魯肽及其類似物的固相合成制備方法。對固相合成較長的多肽而言，無論是通過順序偶聯還是片段偶聯方法，都存在合成成本高、環境污染大、且易產生缺失肽和各種異構體雜質。這些雜質在后期純化中很難去除，也是影響收率的重要因素。專利CN1244872A公布的制備方法總收率為13％。而專利104045707A公開了一種替度魯肽純化方法，其收率為20％。由此可見，目前尚缺乏一種高收率的替度魯肽制備方法。

中國專利CN103159848A公開了GLP-2二串體蛋白及制備方法。它涉及利用重組技術直接制備GLP-2二聚體蛋白，并且在二聚體蛋白中保留有兩個小的氨基酸殘基Gly-Ser接頭，并不是用來生產替度魯肽。

綜上所述，目前尚缺乏一種高效制備替度魯肽的方法。

發明簡述

為了解決現有技術中的問題，本發明的目的在于提供一種高效生產替度魯肽的方法，具體而言，本發明的方法是通過重組表達含有一系列串聯替度魯肽結構的蛋白質來實現。本發明所述的方法可以使得替度魯肽的產率提高25～60％。與其它以融合蛋白形式表達多肽的方式相比，該方法能明顯提高目的多肽在總蛋白中的比例，降低“廢棄”蛋白的比例，從而提高生物轉化率和目的多肽產量。

目標蛋白質的氨基酸組成結構通式為：C₁₉₇H₃₀₇N₅₀O₇₂S₂(C₁₉₇H₃₀₅N₅₀O₇₂S₁)_n，其中n＝1～9等。

氨基酸序列(SEQ ID NO:10)為：

MGTDDDDKHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD(PGTDDDDKHGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD)_n，其中n＝1～9等。

后文用ted2、ted5和ted10代替n＝1、n＝4和n＝9。本文優選n＝1，n＝4，n＝9，更優選n＝4。ted是基于人的GLP-2蛋白序列。

根據本申請的一個方面，本申請提供了一種替度魯肽串聯多肽，其特征在于，所述替度魯肽串聯多肽包含兩個或更多個替度魯肽多肽通過接頭肽連接而成，在接頭處包含酸切和酶切位點。

根據本申請的某些實施方式，所述替度魯肽串聯多肽經過酸切和酶切后，生成替度魯肽分子。

根據本申請的某些實施方式，所述替度魯肽串聯多肽的氨基酸組成結構通式為：C₁₉₇H₃₀₇N₅₀O₇₂S₂(C₁₉₇H₃₀₅N₅₀O₇₂S₁)_n，其中n＝1～9。