[發(fā)明專利]人PDCD1基因sgRNA的用途及其相關藥物

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610532386.X
• 申請日: 2016-07-08
• 公開（公告）號: CN107586777A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發(fā)明（設計）人: 曹躍瓊;袁紀軍;朱向瑩;王慶亮;陳思;白雪
• 申請（專利權）人: 上海吉倍生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙)31219
• 代理人: 李艷,許亦琳

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，更具體地涉及人PDCD1基因sgRNA的用途及其相關藥物。

背景技術

PD-1(CD297、PDCD1)是B7-CD28家族的成員之一，在激活后的T細胞、B細胞、單核細胞和自然殺傷T細胞中表達(Keir,M.E.,M.J.Butte,G.J.Freeman,and A.H.Sharpe.2008.PD-1and its ligands in tolerance and immunity.Annu.Rev.Immunol.26:677–704.)。PD-1有兩種已知配體，分別為PD-L1(B7-H1)(Dong,H.,G.Zhu,K.Tamada,and L.Chen.1999.B7-H1,a third member of the B7family,costimulates T-cell proliferation and interleukin-10secretion.Nat.Med.5:1365–1369.)和PD-L2(B7-DC)(Latchman,Y.,C.R.Wood,T.Chernova,D.Chaudhary,M.Borde,I.Chernova,et al.2001.PD-L2is a second ligand for PD-1 and inhibits T cell activation.Nat.Immunol.2:261–268.)。這兩種受體都在APCs細胞中表達。另外，PD-L1也在一些血液細胞中表達。當PD-L1或PD-L2與PD-1結合時，T細胞受體信號通路被抑制，抑凋亡因子表達下調，p15表達增加使細胞停滯在G1期，SKP2的表達下調。(Patsoukis,N.,J.Brown,V.Petkova,F.Liu,L.Li,and V.A.Boussiotis.2012.Selective effects of PD-1on Akt and Ras pathways regulate molecular components of the cell cycle and inhibit T cell proliferation.Sci.Signal.5:46.)PD-L1在非血液細胞的表達可以抑制免疫系統(tǒng)介導的組織損傷。

CRISPR/CAS9技術是近年來興起的基因編輯操作工具。將CAS9蛋白和sgRNA在細胞內表達后，CAS9和sgRNA組成RNA-protein復合體(RNP)。其中sgRNA通過RNA-DNA堿基互補配對原則，將此RNP定位到基因組的特定位置，這時，CAS9將發(fā)揮其核酸內切酶的特性，在堿基互補配對的位置上對基因組進行切割，形成DNA雙鏈斷裂。在沒有模板的情況下，細胞采用無模板介導的修復機制(nonhomologous end-joining,NHEJ)對基因組進行修復，隨機引入堿基的缺失或增加，使讀碼框(ORF)發(fā)生移位，從而起到將原有基因進行完全敲除的效果。研究表明，長度為20nt的sgRNA序列能夠起到將目的基因敲除的作用，在疾病的機制研究和治療應用中具有重大前景(Fraietta I,Gasparri F.2016.The development of high-content screening(HCS)technology and its importance to drug discovery.Expert Opin Drug Discov.11(5):501-14.)。

能夠有效提高T細胞的活力，減少腫瘤細胞自身PD-L1對T細胞的抑制作用，增強T細胞對腫瘤細胞的殺傷力，是亟待解決的技術問題。

發(fā)明內容

本發(fā)明的第一方面，提供了一種分離的核酸分子，所述核酸分子包含：單鏈RNA，所述單鏈RNA中含有能夠在嚴緊條件下與PDCD1基因雜交的核苷酸序列。

優(yōu)選地，所述PDCD1基因來源于人。

更進一步地，所述單鏈RNA的序列與PDCD1基因中的靶序列基本相同。