[發(fā)明專利]人PDCD1基因sgRNA的用途及其相關(guān)藥物

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610532386.X
• 申請(qǐng)日: 2016-07-08
• 公開（公告）號(hào): CN107586777A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹躍瓊;袁紀(jì)軍;朱向瑩;王慶亮;陳思;白雪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海吉倍生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙)31219
• 代理人: 李艷,許亦琳

1.一種分離的核酸分子，所述核酸分子包含：單鏈RNA，所述單鏈RNA中含有能夠在嚴(yán)緊條件下與PDCD1基因雜交的核苷酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的核酸分子，其特征在于，所述PDCD1基因來源于人。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的核酸分子，其特征在于，所述單鏈RNA的序列與PDCD1基因中的靶序列基本相同。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離的核酸分子，其特征在于，所述PDCD1基因中的靶序列選自如SEQ ID NO：1～131所示之任一序列或如SEQ ID NO：1～131所示之任一序列經(jīng)過取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)堿基序列且具有與如SEQ ID NO：1～131所示之任一序列相同活性的序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一權(quán)利要求所述的分離的核酸分子，其特征在于，所述單鏈RNA為小向?qū)NA。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的分離的核酸分子，其特征在于，所述小向?qū)NA的序列如SEQ ID NO：399～529任一序列所示。

7.一種PDCD1基因干擾核酸構(gòu)建體，含有編碼如權(quán)利要求1～6任一權(quán)利要求所述分離的核酸分子中的基因片段，能表達(dá)所述核苷酸分子。

8.如權(quán)利要求7所述PDCD1基因干擾核酸構(gòu)建體，其特征在于，所述PDCD1基因干擾核酸構(gòu)建體選自病毒載體或質(zhì)粒載體。

9.如權(quán)利要求8所述PDCD1基因干擾核酸構(gòu)建體，其特征在于，所述PDCD1基因干擾核酸構(gòu)建體選自慢病毒載體、腺病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、AAV。

10.如權(quán)利要求9所述PDCD1基因干擾核酸構(gòu)建體，其特征在于，所述慢病毒載體選自：

pLKO.1-puro、pLKO.1-CMV-tGFP、pLKO.1-puro-CMV-tGFP、pLKO.1-CMV-Neo、

pLKO.1-Neo、pLKO.1-Neo-CMV-tGFP、pLKO.1-puro-CMV-TagCFP、

pLKO.1-puro-CMV-TagYFP、pLKO.1-puro-CMV-TagRFP、pLKO.1-puro-CMV-TagFP635、

pLKO.1-puro-UbC-TurboGFP、pLKO.1-puro-UbC-TagFP635、pLKO-puro-IPTG-1xLacO、

pLKO-puro-IPTG-3xLacO、pLP1、pLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、

pLenti6/BLOCK-iT-DEST、pLenti6-GW/U6-laminshrna、pcDNA1.2/V5-GW/lacZ、

pLenti6.2/N-Lumio/V5-DEST、pGCSIL-GFP或pLenti6.2/N-Lumio/V5-GW/lacZ中的任一。

11.一種PDCD1基因干擾慢病毒，由權(quán)利要求7～10任一權(quán)利要求所述干擾核酸構(gòu)建體在慢病毒包裝質(zhì)粒、細(xì)胞系的輔助下，經(jīng)過病毒包裝而成。

12.如權(quán)利要求1～6任一權(quán)利要求所述的分離的核酸分子，權(quán)利要求7～10任一權(quán)利要求所述PDCD1基因干擾核酸構(gòu)建體，和/或權(quán)利要求11所述的PDCD1基因干擾慢病毒在制備T細(xì)胞活性促進(jìn)劑中的用途。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于，所述T細(xì)胞活性的促進(jìn)劑用于作用于T細(xì)胞，降低T細(xì)胞中PDCD1基因的表達(dá)，獲得具有較高的殺傷力的高活性T細(xì)胞，所述高活性T細(xì)胞可通過CART，DC，CIK或DC-CIK免疫治療手段制備腫瘤或自身免疫疾病治療藥物。

14.一種T細(xì)胞活性促進(jìn)劑，其有效物質(zhì)含有如權(quán)利要求1-6任一權(quán)利要求所述的分離的核酸分子，和/或權(quán)利要求7-10任一權(quán)利要求所述PDCD1基因干擾核酸構(gòu)建體，和/或權(quán)利要求11所述的PDCD1基因干擾慢病毒，以及藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

15.一種提高T細(xì)胞活性的試劑盒，所述試劑盒包括：存在于容器中的權(quán)利要求1-6任一權(quán)利要求所述的分離的核酸分子，和/或權(quán)利要求7-10任一權(quán)利要求所述PDCD1基因干擾核酸構(gòu)建體，和/或權(quán)利要求11所述的PDCD1基因干擾慢病毒。