[發明專利]一種可降解草酸的富硒乳酸菌制劑及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201610526164.7
• 申請日: 2016-07-05
• 公開（公告）號: CN107242350B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 黃克和;周亞嬌;鐘文婷;譚德展;劉永旺;陳興祥;甘芳;潘翠玲;周紅
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: A23K10/18
• 分類號: A23K10/18;A23K20/20;A23K50/40;A23K20/142
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;邢賢冬

1.一種可降解草酸的富硒乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于包括菌種活化、種子液的獲得、可降解草酸的富硒乳酸菌制劑的獲得，具體包括以下步驟：

(1)菌種活化：取保存在-20℃的乳酸乳球菌乳酸亞種和屎腸球菌種解凍后，各接種于斜面培養基上溫度30～40℃培養；其中，所述的乳酸乳球菌乳酸亞種為乳酸乳球菌乳酸亞種NJODL1，分類命名為：Lactococcus lactis subsp.lactis，于2011年1月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC NO.4582；所述的屎腸球菌為屎腸球菌NJODE1，分類命名為：Enterococcus Faecium，于2011年1月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC NO.4581；

(2)種子液的獲得：將乳酸乳球菌乳酸亞種和屎腸球菌各接種入種子培養基中，溫度35～40℃，培養30～40h，分別獲得乳酸乳球菌乳酸亞種種子液和屎腸球菌種子液；

(3)可降解草酸的富硒乳酸菌制劑的獲得：將亞硒酸鈉加入發酵培養基中，使培養基中的Se⁴⁺濃度為3～6μg/mL，分別將乳酸乳球菌乳酸亞種種子液和屎腸球菌種子液接種于發酵培養基中，溫度30～40℃，培養30～40h，擴大培養得到乳酸乳球菌乳酸亞種和屎腸球菌的總濃度為1×10¹⁰～10¹¹CFU/mL、有機硒以硒的含量計為3.0～4.0μg/mL的可降解草酸的富硒乳酸菌制劑；所述的發酵培養基為MRS液體培養基；所述的有機硒為硒蛋氨酸。

2.根據權利要求1所述的可降解草酸的富硒乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于步驟(1)中，菌種活化的具體方法為：將保存在-20℃的乳酸乳球菌乳酸亞種和屎腸球菌種解凍后，各接種于斜面培養基上，溫度30～40℃下培養36小時，如此重復，連續傳代3～5次。

3.根據權利要求1所述的可降解草酸的富硒乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于步驟(1)中，所述的斜面培養基為MRS固體培養基，配制方法為，以配制1000mL斜面培養基為例：蛋白胨10g，酵母膏5g，牛肉膏10g，葡萄糖20g，檸檬酸三銨2g，乙酸鈉5g，吐溫80.1mL，MgSO₄·7H₂O 0.58g，K₂HPO₄ 2g，MnSO₄·4H₂O 0.05g，瓊脂20g，水1000mL，調節pH＝6.2～6.4；121℃，高壓蒸汽滅菌15min.。

4.根據權利要求1所述的可降解草酸的富硒乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于步驟(2)中，所述的種子培養基為MRS液體培養基，配制方法為，以配制1000mL斜面培養基為例：蛋白胨10g，酵母膏5g，牛肉膏10g，葡萄糖20g，檸檬酸三銨2g，乙酸鈉5g，吐溫80.1mL，MgSO₄·7H₂O 0.58g，K₂HPO₄ 2g，MnSO₄·4H₂O 0.05g，水1000mL，調節pH＝6.2～6.4；121℃，高壓蒸汽滅菌15min.。

5.根據權利要求1所述的可降解草酸的富硒乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于步驟(3)中，乳酸乳球菌乳酸亞種種子液和屎腸球菌種子液以5％的體積接種量接種于發酵培養基中。

6.權利要求1所述的可降解草酸的富硒乳酸菌制劑在制備預防犬草酸鈣尿石癥的保健品中的應用。

7.權利要求1所述的可降解草酸的富硒乳酸菌制劑在制備預防犬草酸鈣尿石癥的犬糧添加劑中的應用。