[發明專利]一種高精氨酸混合肽的制備方法及其在肝癌治療中的應用

有效

• 申請號: 201610520587.8
• 申請日: 2016-07-05
• 公開（公告）號: CN107574210B
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 陳棟梁;張陽;劉立堅;何立蓉
• 申請（專利權）人: 陳棟梁;新生肽生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/20;C07K1/14;A61K38/01;A61P35/00;A23L33/18;A23L33/175
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種高精氨酸含量的混合肽及其在肝癌治療中的應用。所述制備方法包括如下步驟：利用超高壓對核桃粕和蛋清蛋白混懸液進行預處理，其后在超聲波、微波輔助作用下使用堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶分步酶解預處理產物；酶解液過濾后的清液經反相高效液相色譜法分離其中的目標混合肽；以此混合肽為模板分子，丙烯酸、甲基丙烯酸為功能單體，三乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯劑，異丙基硫雜蒽酮為引發劑，紫外引發聚合形成表面分子印跡膜，用于分離富集酶解清液中的目標混合肽。所述混合肽中精氨酸含量在18％以上；經MTT法檢測發現，所述高精氨酸混合肽能有效抑制人肝癌SMMC?7721細胞的增殖。本法有助于降低產品成本，加速實現工業化生產。

技術領域

本發明涉及一種高精氨酸混合肽的制備方法及其在肝癌治療中的應用，具體涉及一種以核桃粕、蛋清蛋白為原料制備富含精氨酸的混合肽的方法及其在肝癌治療中的應用。

背景技術

癌癥是惡性腫瘤的統稱，特點是機體細胞失去正常的調節控制，過度增殖，同時有不同程度的分化障礙，并常侵犯鄰近組織或轉移到遠離部位。它嚴重威脅全人類健康，位居非正常死亡原因之首。世界衛生組織(WHO)2014年發布的《全球癌癥報告》顯示，2012年中國的新增癌癥病例高居全球第一位，其中肝癌的新增病例和死亡人數均居世界首位。2015年，國家衛計委、國家發改委等16個部門聯合發布的《中國癌癥防治三年行動計劃(2015-2017年)》中明確指出，我國的癌癥防治要以最高發、危害最大的8項癌癥為重點，而肝癌即是我國八大癌之一。

針對惡性腫瘤，傳統的治療方法包括手術切除、化療、放療等。這些方法在一定程度上起到了治療腫瘤的作用，但一旦發生癌細胞局部擴散或潛在轉移，治療往往以失敗告終。且這些傳統療法不可避免地會對人體正常細胞、自身免疫系統造成不同程度的傷害，引起嘔吐、食欲不振、頭痛失眠、脫發潰瘍、糜爛發炎、血象下降等不良反應，病人常因身體難以承受而無法繼續接受治療，嚴重影響癌癥患者生存質量。

現代科學研究發現，許多天然生物活性肽對抑制腫瘤細胞增殖和轉移具有良好功效，且選擇性高、毒副作用小。這些活性肽通過誘導腫瘤分化、抑制腫瘤細胞生長、抑制腫瘤新生血管生成、提高腫瘤細胞對藥物的敏感性、降低化療損傷、增強藥物對腫瘤細胞的殺傷力、干擾腫瘤細胞DNA合成、提高機體免疫力等作用達到治療或輔助治療惡性腫瘤的目的。近年來不斷有研究證實，增量精氨酸對腫瘤細胞的抑制及誘導凋亡作用顯著。腫瘤細胞中多胺代謝活躍，多胺是其迅速分裂、增殖必需物質，增量精氨酸能通過抑制鳥氨酸脫羧酶活性來抑制多胺的生物合成，從而抑制癌細胞增殖；精氨酸經一氧化氮合酶作用后生成NO，NO可阻斷腫瘤細胞的能量代謝和DNA復制，或者引起腫瘤細胞DNA損傷，從而抑制腫瘤細胞的生長或引起腫瘤細胞死亡；同時，NO可抑制細胞黏附分子的表達，從而阻止細胞的黏附，在腫瘤細胞脫離原發組織，轉移至其它部位形成新病灶的過程中，這些黏附分子起著重要作用；此外，精氨酸還能增加T淋巴細胞的產生和功能，增加體內白介素IL-2的生成及其受體表達，調節和激活體內巨噬細胞活性，從而提高腫瘤宿主自身免疫力。國外已有研究開始嘗試對癌癥患者采用不平衡氨基酸療法，通過調整腫瘤宿主體內某些氨基酸的含量，干擾腫瘤細胞的代謝和功能，進而抑制腫瘤的生長或誘導其凋亡。另有報道稱，富含精氨酸等親水性氨基酸的親水性多肽，可通過靜電吸引方式，特異性作用于腫瘤細胞，導致細胞膜迅速破裂，細胞內容物滲漏，最終引起細胞死亡；也有研究稱多肽分子結構中的堿性氨基酸(精氨酸、賴氨酸等)對其抗腫瘤活性有一定影響。這些都為本發明所述的高精氨酸混合肽的抑癌功效提供了堅實的理論基礎。

核桃粕是核桃加工副產品，蛋白質消化率高、氨基酸含量豐富且種類齊全，但在我國主要用于飼料工業，深度加工不夠而造成資源貶值；雞蛋清蛋白不僅富含人體8種必需氨基酸，且組成與人體蛋白的氨基酸組成接近，人對其消化利用率極高。本發明首次使用來自雞蛋和核桃的動、植物混合蛋白為原料，通過超高壓-超聲-微波輔助酶解、表面分子印跡膜分離純化等手段，制備富含精氨酸的活性混合肽，并將其應用于肝癌治療，在對患者進行營養補充的同時抑制癌細胞增殖，有效改善肝癌患者的生存質量。與之相關的應用研究至今未見報道。

發明內容