[發(fā)明專利]抗CD44v6和CD3特異性雙靶向抗體、含該雙靶向抗體表達(dá)盒的微環(huán)DNA及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610514324.6
• 申請(qǐng)日: 2016-06-30
• 公開（公告）號(hào): CN107556388A
• 公開（公告）日: 2018-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉運(yùn)洪;陳志英;何成宜;鐘育健;張婧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院
• 主分類號(hào): C07K16/46
• 分類號(hào): C07K16/46;A61K39/395;A61K47/68;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司44202
• 代理人: 郝傳鑫,熊永強(qiáng)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥和診療領(lǐng)域，具體涉及一種抗CD44v6和CD3特異性雙靶向抗體、含該雙靶向抗體表達(dá)盒的微環(huán)DNA及應(yīng)用。

背景技術(shù)

CD44分子是細(xì)胞表面的整合膜蛋白，屬黏附分子家族，其正常功能是作為受體識(shí)別透明質(zhì)酸(HA)和膠原蛋白I、IV，主要參與免疫識(shí)別、淋巴細(xì)胞聚集以及細(xì)胞-細(xì)胞，細(xì)胞—基質(zhì)之間的特異性黏附過(guò)程。可分為標(biāo)準(zhǔn)型(CD44s)和拼接變異體型(CD44v)。目前認(rèn)為CD44拼接變異體型6(CD44v6)與腫瘤的進(jìn)展程度、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。主要參與腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞和宿主基質(zhì)的異質(zhì)性粘附，使腫瘤細(xì)胞得以脫離與周圍細(xì)胞的粘附而發(fā)生浸潤(rùn)或轉(zhuǎn)移，在腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中起促進(jìn)作用，即直接參與腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程。此外，通過(guò)加強(qiáng)腫瘤細(xì)胞c-Met和VEGFR-2等血管信號(hào)通路的活化，促進(jìn)腫瘤組織中新血管的形成，從而促進(jìn)腫瘤組織生長(zhǎng)。而其在正常組織中表達(dá)量非常低，并且相對(duì)于EGFR等腫瘤相關(guān)抗原，CD44v6蛋白在腫瘤細(xì)胞表面的平均數(shù)量更多。因此是腫瘤診斷和靶向治療理想的分子靶點(diǎn)。

近年來(lái)，在腫瘤免疫治療領(lǐng)域，出現(xiàn)了利用雙靶向抗體(Bispecific antibody,BsAb)介導(dǎo)T細(xì)胞重要的角色，具有T細(xì)胞受體(T cell receptor，TCR)，能特異性識(shí)別并結(jié)合表達(dá)目標(biāo)抗原的細(xì)胞，并分泌穿孔素和顆粒酶殺滅靶細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞由于缺少免疫粘附分子和共刺激分子等原因,使得機(jī)體免疫無(wú)法有效識(shí)別和活化，從而使得CTL無(wú)法清除癌細(xì)胞。BsAb能夠同時(shí)與T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特異性抗原結(jié)合，可在T細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間形成免疫突觸(immune synapse)，發(fā)揮T細(xì)胞受體(TCR)一樣的功能，從而激活T細(xì)胞免疫機(jī)制，介導(dǎo)T細(xì)胞殺死靶細(xì)胞。

目前報(bào)道了一種CD44v6抗體，即cMAb U36，由荷蘭自由大學(xué)醫(yī)院(Free University Hospital)研發(fā)，屬于人鼠嵌合抗體，目前用于聯(lián)合¹²⁵I等放射性同位素標(biāo)記，治療轉(zhuǎn)移性頭頸鱗狀細(xì)胞癌(head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC)，目前處于臨床前期實(shí)驗(yàn)。該抗體只能結(jié)合CD44v6抗原和CD44v6表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞，不能結(jié)合T細(xì)胞，無(wú)法介導(dǎo)T細(xì)胞殺傷；可以通過(guò)ADCC(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)或CDC(complement-dependent cytotoxicity)靶向殺滅CD44v6抗原陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞，可以通過(guò)標(biāo)記的¹²⁵I等放射性同位素來(lái)殺傷腫瘤，因?yàn)槠涫笤葱陨形赐耆脕?lái)人類治療時(shí)還會(huì)存在宿主抗移植物反應(yīng)，主要相關(guān)論文(British Journal of Cancer(1997)75,1049–1060.)。

另一種CD44v6抗體，即AbD15179，由瑞典烏普薩拉大學(xué)(Uppsala University)研發(fā)，屬于全人Fab片段，通過(guò)噬菌體庫(kù)技術(shù)篩選得到，目前用于聯(lián)合¹²⁵I等放射性同位素標(biāo)記，治療轉(zhuǎn)移性頭頸鱗狀細(xì)胞癌(head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC)，目前處于臨床前期實(shí)驗(yàn)。該抗體也只能結(jié)合CD44v6抗原和CD44v6表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞，不能結(jié)合T細(xì)胞，無(wú)法介導(dǎo)T細(xì)胞殺傷；尚不能通過(guò)ADCC(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)或CDC(complement-dependent cytotoxicity)靶向殺滅CD44v6 抗原陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞，只能通過(guò)標(biāo)記的¹²⁵I等放射性同位素來(lái)殺傷腫瘤。主要相關(guān)論文(Haylock et al.EJNMMI Research 2014,4:11)。