[發(fā)明專利]生物補(bǔ)片的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610511579.7
• 申請日: 2016-07-04
• 公開（公告）號: CN105963787B
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 史真;史偉云
• 申請（專利權(quán)）人: 拜歐迪賽爾（北京）生物科技有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種脫細(xì)胞肌腱和小腸漿膜組織作為生物補(bǔ)片的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)取豬的肌腱，清除肌腱表面的外膜和滑膜組織；取豬的空腸和回腸用水沖洗干凈，鈍性刮除小腸粘膜、粘膜下層和肌層，僅留下漿膜纖維層，用PBS漂洗干凈；

(2)肌腱和小腸漿膜纖維層脫細(xì)胞過程中全程使用一種保護(hù)肌腱和小腸漿膜結(jié)構(gòu)的保護(hù)液；

(3)采用高靜壓技術(shù)預(yù)分離肌腱和小腸漿膜組織內(nèi)的細(xì)胞，通過物理的方法將肌腱和小腸漿膜結(jié)構(gòu)內(nèi)的細(xì)胞松解和破碎；

(4)采用復(fù)合核酸酶方法消化殘余細(xì)胞核；

(5)利用去垢劑脫除松散破碎細(xì)胞片；

(6)用保護(hù)液對肌腱和小腸漿膜進(jìn)行漂洗；

所述保護(hù)液的成分為：DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基粉末5-10g/L、L-組氨酸鹽酸鹽2.87-3.83g/L、硫酸軟骨素25-30g/L、低分子右旋糖酐20-35g/L、羥丙基甲基纖維素2-8g/L、別嘌呤醇0.5-0.8g/L、HEPES緩沖液20-25ml/L、鹽酸地塞米松1-2mg/L、還原型谷胱苷肽1.5-3g/L以及左氧氟沙星0.1-0.2g/L；

所述高靜壓技術(shù)所采用的條件為200-400MPa，高靜壓頻率為2-5次，每次為1～2分鐘。

2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，獲取的成年豬肌腱和小腸漿膜，經(jīng)處理清洗，制為1～3cm×3～5cm大小的補(bǔ)片備用。

3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其中所述保護(hù)液的pH值為7.2-8.0，滲透壓為300-400mOsm/kgH₂O。

4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其中所述復(fù)合核酸酶，DNA酶的濃度為100-2000U/ml，核酸酶的濃度為100-2000U/ml，DNA酶或核酸酶的脫細(xì)胞核時(shí)間為1-4小時(shí)，處理溫度為15-30攝氏度。

5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其中所述去垢劑Triton X-100的濃度為0.5-8％，去垢劑使用時(shí)間為1-4小時(shí)。

6.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其中肌腱和小腸漿膜在保護(hù)液中漂洗的時(shí)間為0.5～4小時(shí)。

7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，制備完成的肌腱和小腸漿膜補(bǔ)片需貼附在硝酸纖維素膜上，放入無水氯化鈣分子篩內(nèi)脫水，再裝袋密封并標(biāo)記后經(jīng)鈷60照射滅菌，以4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，在臨床使用前將保存的肌腱和小腸漿膜補(bǔ)片放入4000u的妥布霉素生理鹽水溶液浸泡10分鐘。