[發明專利]一種固定化蝸牛酶制備煙草浸膏的方法

有效

• 申請號: 201610509691.7
• 申請日: 2016-07-03
• 公開（公告）號: CN106036984B
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發明（設計）人: 賴高生
• 申請（專利權）人: 賴高生
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;A24B3/14;A24B15/24
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技術領域

本發明涉及一種固定化蝸牛酶制備煙草浸膏的方法，屬于煙草浸膏制備技術領域。

背景技術

中國煙草植物的種植面積和產量均居世界首位，煙葉不僅是卷煙工業的重要原料，也是生產多種生物有機成分和植物次生代謝產物不可多的的原料，在煙草復烤、運輸、儲存和卷煙生產加工過程中，有大量的煙葉碎片產生，煙草碎片、碎末及煙灰棒的比例高達煙葉質量的20%～30%，其用途主要是用于制備煙用香料和再造煙葉。煙草碎片、碎末及煙灰棒中含有較多的與煙草質量呈負相關關系的纖維素、果膠、淀粉、蛋白、半纖維素及木質素等大分子物質，而與煙草特征香氣成分的生成關系密切的還原糖和氨基酸的含量則較低，因此，利用煙葉加工副產品制備的煙用香料和再造煙葉的品質還有待提升。因此，如何將煙葉碎片變廢為寶，已成為一個亟待解決的問題。煙草浸膏作為煙葉碎片的高附加值產品，解決了煙葉碎片制備煙絲對高品質的要求和煙葉碎片制備煙草薄片低效益的問題。煙草浸膏在卷煙中具有豐富煙香，體現煙草本香的作用。但由于煙草浸膏中蛋白質含量高，采用酶法制備浸膏，易殘留，導致其刺激性增加，且柔和細膩度差。蝸牛酶是從蝸牛的嗦囊和消化道中制備的混合酶，它含有纖維素酶，果膠酶，淀粉酶，蛋白酶等20多種酶。 蝸牛酶是很有價值的一種酶。它可以用于酵母細胞壁的破碎，廣泛用于細胞生物學和基因工程學的研究。因此利用蝸牛酶制備煙草浸膏，在相關領域具有很好的發展前景。

發明內容

本發明所要解決的技術問題：針對目前酶法制備煙草浸膏，由于煙草浸膏中蛋白質含量高，易殘留，導致其刺激性增加，且柔和細膩度差的弊端，提供了一種從蝸牛消化腺中提取蝸牛酶配制緩沖液，向里加入磁流體懸浮液，輔以海藻酸鈉固定，制得固定化蝸牛酶，用其酶解煙葉并輔以桂花精油來提高浸膏細膩度，制得煙草浸膏的方法。本發明利用蝸牛酶中富含的各種活性酶來酶解煙葉，高效實用，再用磁性粒子固定，解決了傳統酶法制備浸膏，蛋白質易殘留的問題，輔以桂花精油的表面活性功能，又彌補了傳統酶法制備的浸膏刺激性強、柔和細膩度差的缺陷，可廣泛推廣使用。

為解決上述技術問題，本發明采用如下所述的技術方案是：

（1）挑選20～30只體長7～8cm的非洲大蝸牛放于不銹鋼篩網中，每天用流動去離子水沖洗3～5h，并饑餓處理5～7天以吐出體內雜物，吐雜結束后人工剖出蝸牛消化腺，吸取消化液轉存于燒杯中，立即將所得消化液放入臥式離心機，在4～6℃下以10000～12000r/min轉速離心分離10～15min，得上層澄清蝸牛酶液，備用；

（2）按摩爾比2:1，將質量濃度為0.3mol/L硫酸亞鐵和質量濃度0.2mol/L氯化鐵溶液混合后，用質量濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至8.5～9.5，在70～80℃水浴條件下攪拌反應30～40min，得磁流體懸浮液；

（3）向上述磁流體懸浮液中加入其體積1/5質量濃度為10%海藻酸鈉溶液，混合得混合液，將其置于磁力攪拌機上，在攪拌狀態下加入混合液總質量3～5%失水山梨醇脂肪酸酯，繼續攪拌乳化5～10min后，再加入混合液總質量1～3%戊二醛，在30～40℃下反應3～5h；

（4）反應結束后，將反應液倒入等體積的質量濃度為10%氯化鈣溶液中，并放入4～6℃冰水浴中靜置沉淀過夜，過濾得沉淀物，放入烘箱干燥得磁性海藻酸鈉載體，量取300～500mL備用的上層澄清蝸牛酶液溶于其等體積pH為4.6～5.6醋酸-醋酸鈉緩沖液中，加入15～25g磁性海藻酸鈉載體，用漩渦振蕩儀在30～40℃下以30～50W功率振蕩吸附過夜后，過濾并真空凍干后，得固定化蝸牛酶；

（5）稱取100～200g煙葉放入氣流粉碎機粉碎后過100目標準篩，將過篩煙葉碎片按固液比為1:5加入去離子水中，混合后放入鐵鍋，在95～100℃下蒸煮40～60min，蒸煮結束后冷卻至室溫，將蒸煮物轉入陶瓷發酵罐中，并加入蒸煮物總質量5～8%固定化蝸牛酶和20～30mL桂花精油，在35～45℃下保溫酶解2～4h；

（6）酶解結束后，過濾得酶解液，并回收固定化蝸牛酶，再向酶解液中加入其體積1～2倍質量濃度為95%乙醇溶液，放入-30～-20℃冰箱中，靜置沉淀過夜，沉淀完成后，用臥式離心機以3000～4000r/min轉速離心分離10～15min，去除濾渣，得濾液；

（7）將上述濾液放入真空濃縮罐中，降低罐內壓力至900～1000Pa，減壓濃縮至原質量1/4，得濃縮液，再轉入噴霧干燥機中干燥至其水分含量為3～5%，出料后裝罐，即得煙草浸膏。