[發明專利]一種固定化蝸牛酶制備煙草浸膏的方法

有效

• 申請號: 201610509691.7
• 申請日: 2016-07-03
• 公開（公告）號: CN106036984B
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發明（設計）人: 賴高生
• 申請（專利權）人: 賴高生
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;A24B3/14;A24B15/24
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種固定化蝸牛酶制備煙草浸膏的方法，其特征在于具體制備步驟為：

（1）挑選20～30只體長7～8cm的非洲大蝸牛放于不銹鋼篩網中，每天用流動去離子水沖洗3～5h，并饑餓處理5～7天以吐出體內雜物，吐雜結束后人工剖出蝸牛消化腺，吸取消化液轉存于燒杯中，立即將所得消化液放入臥式離心機，在4～6℃下以10000～12000r/min轉速離心分離10～15min，得上層澄清蝸牛酶液，備用；

（2）按摩爾比2:1，將質量濃度為0.3mol/L硫酸亞鐵和質量濃度0.2mol/L氯化鐵溶液混合后，用質量濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至8.5～9.5，在70～80℃水浴條件下攪拌反應30～40min，得磁流體懸浮液；

（3）向上述磁流體懸浮液中加入其體積1/5質量濃度為10%海藻酸鈉溶液，混合得混合液，將其置于磁力攪拌機上，在攪拌狀態下加入混合液總質量3～5%失水山梨醇脂肪酸酯，繼續攪拌乳化5～10min后，再加入混合液總質量1～3%戊二醛，在30～40℃下反應3～5h；

（4）反應結束后，將反應液倒入等體積的質量濃度為10%氯化鈣溶液中，并放入4～6℃冰水浴中靜置沉淀過夜，過濾得沉淀物，放入烘箱干燥得磁性海藻酸鈉載體，量取300～500mL備用的上層澄清蝸牛酶液溶于其等體積pH為4.6～5.6醋酸-醋酸鈉緩沖液中，加入15～25g磁性海藻酸鈉載體，用漩渦振蕩儀在30～40℃下以30～50W功率振蕩吸附過夜后，過濾并真空凍干后，得固定化蝸牛酶；

（5）稱取100～200g煙葉放入氣流粉碎機粉碎后過100目標準篩，將過篩煙葉碎片按固液比為1:5加入去離子水中，混合后放入鐵鍋，在95～100℃下蒸煮40～60min，蒸煮結束后冷卻至室溫，將蒸煮物轉入陶瓷發酵罐中，并加入蒸煮物總質量5～8%固定化蝸牛酶和20～30mL桂花精油，在35～45℃下保溫酶解2～4h；

（6）酶解結束后，過濾得酶解液，并回收固定化蝸牛酶，再向酶解液中加入其體積1～2倍質量濃度為95%乙醇溶液，放入-30～-20℃冰箱中，靜置沉淀過夜，沉淀完成后，用臥式離心機以3000～4000r/min轉速離心分離10～15min，去除濾渣，得濾液；

（7）將上述濾液放入真空濃縮罐中，降低罐內壓力至900～1000Pa，減壓濃縮至原質量1/4，得濃縮液，再轉入噴霧干燥機中干燥至其水分含量為3～5%，出料后裝罐，即得煙草浸膏。