[發明專利]可誘導型siRNA表達載體及其制備和應用

有效

• 申請號: 201610506634.3
• 申請日: 2016-06-30
• 公開（公告）號: CN107557363B
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 吳立剛;尚仁福
• 申請（專利權）人: 中國科學院分子細胞科學卓越創新中心
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;C12N7/01
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 馬莉華;劉妍珺

1.一種短發夾RNA(shRNA)序列，其特征在于，所述shRNA序列為核苷酸序列，并且從5′端到3′端依次具有以下區域：

(a)5′端旁側序列區，所述5′端旁側序列區長度大于或等于17nt；

(b)5′端配對siRNA區域，所述5′端配對siRNA區域長度大于或等于19nt；

(c)頂端環區域，所述頂端環區域的序列如SEQ ID NO.:1所示；

(d)3′端配對siRNA區域，所述3′端配對siRNA區域長度大于或等于19nt，并且所述5′端配對siRNA區域與3′端配對siRNA區域形成雙鏈siRNA區域，所述雙鏈區域長度大于或等于19bp；

(e)3′端旁側序列區，所述3′端旁側序列區長度大于或等于17nt；

其中，所述shRNA序列產生siRNA，且所述siRNA的核苷酸序列對應于所述3′端配對siRNA區域或5′端配對siRNA區域。

2.如權利要求1所述的shRNA序列，其特征在于，所述5′端配對siRNA區域長度為19-28nt，更佳地為20-25nt。

3.如權利要求1所述的shRNA序列，其特征在于，所述3′端配對siRNA區域長度為19-28nt，更佳地為20-25nt。

4.如權利要求1所述的shRNA序列，其特征在于，所述的5′端旁側序列區含有限制性內切酶識別序列，較佳地，所述的3′端旁側序列區含有限制性內切酶識別序列。

5.一種表達盒，其特征在于，所述表達盒包含權利要求1所述的shRNA序列的編碼序列以及任選的與所述編碼序列操作性相連的啟動子和終止信號。

6.一種構建物，其特征在于，所述構建物從5′端到3′端依次具有以下元件：

(i)第一元件，所述的第一元件包含一熒光蛋白基因5′UTR及其包含的內含子序列和插入所述內含子序列中的權利要求1所述的shRNA序列的編碼序列；

(ii)第二元件，所述的第二元件包含所述熒光蛋白的編碼序列。

7.一種慢病毒載體，其特征在于，所述的慢病毒載體包括慢病毒基因組序列，以及反向插入所述慢病毒基因組序列的如權利要求5所述的表達盒作為第一表達盒。

8.如權利要求7所述的慢病毒載體，其特征在于，所述的慢病毒載體還包括(ii)表達所述誘導型啟動子的調節蛋白的第二表達盒。

9.一種細胞，其特征在于，所述細胞包含權利要求1所述的shRNA序列、權利要求5所述的表達盒、權利要求6所述的構建物、或權利要求7所述的慢病毒表達載體。

10.一種產生siRNA的方法，其特征在于，所述方法包括：

1)將權利要求1所述的shRNA序列、權利要求5所述的表達盒、權利要求6所述的構建物、或權利要求7所述的慢病毒表達載體轉入哺乳動物細胞；和

2)培養所述哺乳動物細胞，從而在所述哺乳動物細胞中產生siRNA。