[發明專利]一種離心層析熒光免疫檢測技術及其用途在審

申請號：	201610477903.8	申請日：	2016-06-27
公開（公告）號：	CN107543922A	公開（公告）日：	2018-01-05
發明（設計）人：	劉鳳鳴	申請（專利權）人：	北京康華源科技發展有限公司
主分類號：	G01N33/558	分類號：	G01N33/558;G01N21/64
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種離心層析熒光免疫檢測技術及其用途
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種離心層析熒光免疫檢測技術及其用途，屬于免疫檢測技術領域。

背景技術

免疫學檢測技術是應用免疫學原理設計的測定抗原、抗體、免疫細胞及化學成分等的實驗手段，廣泛用于來源于人體和動物體可進行疾病診斷和健康檢測的樣品以及用于環境、藥物分析、食品和工業分析的樣品。常用的有免疫濁度技術、固相酶免疫測定技術、化學發光檢測技術、免疫熒光標記技術、流式細胞術、膠體金技術等。免疫濁度技術，也稱免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中特異結合，產生一定大小的復合物，形成光的折射或吸收，測定這種折射或吸收后的透射光或散射光作為計算單位，用于定量檢測，但檢測靈敏度低，不適合于微量檢測。固相酶免疫測定技術基于抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記，結合在固相載體表面的抗原或抗體保持其免疫學活性，抗原或抗體的酶結合物既保留其免疫學活性，又保留酶的活性，在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應，具有靈敏度高、線性響應范圍寬和易于實現自動化等顯著優點，但檢測反應時間長限制了其使用。化學發光檢測技術是一種高靈敏的微量及痕量分析技術，具有操作方便、靈敏度高、線性響應范圍寬和易于實現自動化等顯著優點，廣泛地應用于環境、臨床、藥物分析、食品和工業分析中，也是基于抗原或抗體的固相分離手段及抗原或抗體的發光試劑標記技術，但檢測反應時間長及對檢測設備的要求高也影響其使用。免疫熒光標記技術、流式細胞術、膠體金技術也是常用的檢測技術被廣泛使用，但均有其相應的不足，檢測反應時間長或靈敏度、準確性欠缺是普遍存在的不足。高靈敏度、快速、小型化、全定量、自動化是目前臨床免疫檢測技術產品的發展趨勢，但現有的都無法同時實現上述功能。

發明內容

本發明的目的是提供一種離心層析熒光免疫檢測技術裝置及其用途。本發明具有靈敏度高、檢測時間短、檢測穩定性好、使用便捷的特點。

本發明提供的一種離心層析熒光免疫檢測組合套裝，特征在于，所述檢測組合套裝含有待檢物特異性結合物、微粒、固相膜、熒光物質、離心裝置以及熒光檢測器，其中所述的熒光物質包括有機熒光染料和稀土元素熒光染料中的至少一種；所述微粒為能夠直接和/或通過化學交聯方式與蛋白質和/或所述熒光物質形成非特異性結合并維持穩定的顆粒；所述固相膜為具有與蛋白質非特異性結合特性的膜質物質；所述離心裝置為能夠離心驅動液相在所述固相膜上層析流動的結構；所述待檢物特異性結合物為具有特異性結合能力的抗原、抗體、親和素、生物素及其類似物中的至少一種。

一種所述檢測組合套裝的檢測方法，其特征在于：所述檢測方法為如下（A）-（D）中任一種：

（A）包括如下步驟：

1）用所述待檢物特異性結合物和所述熒光物質同時標記所述微粒；

2）用含有待檢物的樣本與所述標記后的微粒反應，所述待檢物通過與位于所述標記后的微粒上的所述待檢物特異性結合物結合，進而形成“熒光物質-微粒-待檢物特異性結合物-待檢物”復合物，即復合物1；

3）在所述固相膜上包被能夠通過與位于復合物1上的待檢物形成特異性結合的第二待檢物特異性結合物；

4）用含有所述復合物1的液相通過層析流經所述固相膜上包被的所述第二待檢物特異性結合物，形成“熒光物質-微粒-待檢物特異性結合物-待檢物-第二待檢物特異性結合物”復合物，即復合物2，并被捕獲固定在所述固相膜上；

5）采用離心層析法用清洗液清洗所述固相膜上未結合的所述復合物1及殘留的所述熒光物質；

6）將清洗后的所述固相膜用所述熒光檢測器檢測被間接固定到所述固相膜上的所述熒光物質通過激發光激發產生熒光的發光值，以檢測所述待檢物的含量；

（B）包括如下步驟：

1）用所述待檢物特異性結合物標記所述微粒；

2）用所述熒光物質標記所述待檢物特異性結合物的特異性結合物，形成“熒光物質-待檢物特異性結合物的特異性結合物”，即熒光物質標記物；

3）用含有待檢物的樣本與所述標記后的微粒反應，所述待檢物通過與位于所述標記后的微粒上的所述待檢物特異性結合物結合，進而形成“微粒-待檢物特異性結合物-待檢物”復合物，即復合物3；