[發明專利]一種離心層析熒光免疫檢測技術及其用途

在審

• 申請號: 201610477903.8
• 申請日: 2016-06-27
• 公開（公告）號: CN107543922A
• 公開（公告）日: 2018-01-05
• 發明（設計）人: 劉鳳鳴
• 申請（專利權）人: 北京康華源科技發展有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種離心層析熒光免疫檢測組合套裝，特征在于，所述檢測組合套裝含有待檢物特異性結合物、微粒、固相膜、熒光物質、離心裝置以及熒光檢測器，其中所述的熒光物質包括有機熒光染料和稀土元素熒光染料中的至少一種；所述微粒為能夠直接和/或通過化學交聯方式與蛋白質和/或所述熒光物質形成非特異性結合并維持穩定的顆粒；所述固相膜為具有與蛋白質非特異性結合特性的膜質物質；所述離心裝置為能夠離心驅動液相在所述固相膜上層析流動的結構；所述待檢物特異性結合物為具有特異性結合能力的抗原、抗體、親和素、生物素及其類似物中的至少一種。

2.一種權利要求1所述檢測組合套裝的檢測方法，其特征在于：所述檢測方法為如下（A）-（D）中任一種：

（A）包括如下步驟：

1）用所述待檢物特異性結合物和所述熒光物質同時標記所述微粒；

2）用含有待檢物的樣本與所述標記后的微粒反應，所述待檢物通過與位于所述標記后的微粒上的所述待檢物特異性結合物結合，進而形成“熒光物質-微粒-待檢物特異性結合物-待檢物”復合物，即復合物1；

3）在所述固相膜上包被能夠通過與位于復合物1上的待檢物形成特異性結合的第二待檢物特異性結合物；

4）用含有所述復合物1的液相通過層析流經所述固相膜上包被的所述第二待檢物特異性結合物，形成“熒光物質-微粒-待檢物特異性結合物-待檢物-第二待檢物特異性結合物”復合物，即復合物2，并被捕獲固定在所述固相膜上；

5）采用離心層析法用清洗液清洗所述固相膜上未結合的所述復合物1及殘留的所述熒光物質；

6）將清洗后的所述固相膜用所述熒光檢測器檢測被間接固定到所述固相膜上的所述熒光物質通過激發光激發產生熒光的發光值，以檢測所述待檢物的含量；

（B）包括如下步驟：

1）用所述待檢物特異性結合物標記所述微粒；

2）用所述熒光物質標記所述待檢物特異性結合物的特異性結合物，形成“熒光物質-待檢物特異性結合物的特異性結合物”，即熒光物質標記物；

3）用含有待檢物的樣本與所述標記后的微粒反應，所述待檢物通過與位于所述標記后的微粒上的所述待檢物特異性結合物結合，進而形成“微粒-待檢物特異性結合物-待檢物”復合物，即復合物3；

4）在所述固相膜上包被所述第二待檢物特異性結合物；

5）用含有所述復合物3的液相通過層析流經所述固相膜上包被的所述第二待檢物特異性結合物，形成“微粒-待檢物特異性結合物-待檢物-第二待檢物特異性結合物”復合物，即復合物4，并被捕獲固定在所述固相膜上；

6）用含有所述熒光物質標記物的液相通過層析流經被捕獲在所述固相膜上的復合物4，通過與所述待檢物特異性結合物結合，形成“熒光物質標記物-復合物4”復合物，即復合物5，并被捕獲固定在所述固相膜上；

6）采用離心層析法用清洗液清洗所述固相膜上未結合的所述熒光物質標記物及殘留的所述熒光物質；

7）將清洗后的所述固相膜用所述熒光檢測器檢測被間接固定到所述固相膜上的所述熒光物質通過激發光激發產生熒光的發光值，以檢測所述待檢物的含量；

（C）包括如下步驟：

1）用所述待檢物特異性結合物和所述熒光物質同時標記所述微粒；

2）用含有待檢物的樣本與所述標記后的微粒反應，所述待檢物通過與位于所述標記后的微粒上的所述待檢物特異性結合物結合，所述待檢物通過與所述待檢物特異性結合物結合，進而形成“熒光物質-微粒-待檢物特異性結合物-待檢物”復合物，即所述復合物1；

3）用中間物質A標記所述第二待檢物特異性結合物；

4）在所述固相膜上包被能夠與所述中間物質A形成特異性結合的中間物質B；

5）用含有所述復合物1的液相與所述中間物質A標記的第二待檢物特異性結合物進行反應，形成“熒光物質-微粒-待檢物特異性結合物-待檢物-第二待檢物特異性結合物-中間物質A”復合物，即復合物6；

6）用含有所述復合物6的液相通過層析流經所述固相膜上包被的所述中間物質B，形成“熒光物質-微粒-待檢物特異性結合物-待檢物-第二待檢物特異性結合物-中間物質A-中間物質B”復合物，即復合物7，并被捕獲固定在所述固相膜上；

7）采用離心層析法用清洗液清洗所述固相膜上未結合的所述復合物6及殘留的所述熒光物質；

8）將清洗后的所述固相膜用所述熒光檢測器檢測被間接固定到所述固相膜上的所述熒光物質通過激發光激發產生熒光的發光值，以檢測所述待檢物的含量；

（D）包括如下步驟：

1）用所述待檢物特異性結合物標記所述微粒；

2）用所述熒光物質標記所述待檢物特異性結合物的特異性結合物，形成“熒光物質-待檢物特異性結合物的特異性結合物”，即所述熒光物質標記物；

3）用含有待檢物的樣本與所述標記后的微粒反應，所述待檢物通過與位于所述標記后的微粒上的所述待檢物特異性結合物結合，進而形成“微粒-待檢物特異性結合物-待檢物”復合物，即所述復合物3；

4）用所述中間物質A標記所述第二待檢物特異性結合物；

5）在所述固相膜上包被能夠與所述中間物質A形成特異性結合的所述中間物質B；

6）用含有所述復合物3的液相與所述中間物質A標記的第二待檢物特異性結合物反應，形成“微粒-待檢物特異性結合物-待檢物-第二待檢物特異性結合物-中間物質A”復合物，即復合物8；

7）用含有所述復合物8的液相通過層析流經所述固相膜上包被的所述中間物質B，形成“微粒-待檢物特異性結合物-待檢物-第二待檢物特異性結合物-中間物質A-中間物質B”復合物，即復合物9，并被捕獲固定在所述固相膜上；

8）用含有所述熒光物質標記物的液相通過層析流經被捕獲在所述固相膜上的復合物9，通過與待檢物特異性結合物結合，形成“熒光物質-待檢物特異性結合物的特異性結合物-復合物9”復合物，即復合物10，并被捕獲固定在所述固相膜上；

9）采用離心層析法用清洗液清洗所述固相膜上未結合的所述熒光物質標記物及殘留的所述熒光物質；

10）將清洗后的所述固相膜用所述熒光檢測器檢測被間接固定到所述固相膜上的所述熒光物質通過激發光激發產生熒光的發光值，以檢測所述待檢物的含量。