[發明專利]一種利用生物交聯劑制備注射型長效透明質酸凝膠的方法

有效

• 申請號: 201610472340.3
• 申請日: 2016-06-24
• 公開（公告）號: CN107540763B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 徐剛;楊軍
• 申請（專利權）人: 寧夏妙朗生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08;C08J3/24
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 肖愛華

本發明提供了一種利用生物交聯劑制備注射型長效透明質酸凝膠的方法。該方法利用活化的低分子透明質酸作為交聯核心，選擇帶有環氧基的化學試劑作為活化劑對低分子透明質酸進行活化，使其帶有多個環氧基團，成為生物交聯劑；通過多步乙醇沉淀純化上述生物交聯劑，并作為交聯核心對游離的大分子透明質酸進行交聯；制粒獲得均勻的凝膠顆粒之后，利用低當量的化學試劑對顆粒內部進行二次加強交聯之后，獲得長效的凝膠顆粒。該方法利用帶有環氧基的交聯劑活化了的低分子透明質酸作為生物交聯劑對高分子透明質酸進行交聯，大大降低了化學試劑的用量及殘留量；二次強化交聯對已成型透明質酸凝膠顆粒進行結構加固，大大加強了其在體內的留存時間。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，涉及一種利用生物交聯劑制備注射型長效透明質酸凝膠的方法。

背景技術

透明質酸為一種生物多糖大分子，其主要來源為動物組織如雞冠以及鏈球菌屬的發酵。透明質酸是一種線性重復的結構，其功能單體分子量約為400Da，由一分子β-1,3-葡萄糖乙酰胺和一分子β-1,4-葡萄糖酸構成。其功能單體隨后以β-1,3健結重復連接，從而形成具有高分子量的聚合物。

天然透明質酸對生物體具有較好的形容性，不會引發機體對其產生免疫應答；此外，透明質酸的水溶液具有較好的粘彈性及保濕特性，并且能夠被機體降解；因此，其在化妝品及生物醫療領域具有較好的應用前景。

在實際應用過程中，由于線性的天然透明質酸可以被機體分泌的透明質酸酶降解，因此其在體內穩定存在的時間較短，并且機械強度并不高，因此在實際應用過程中，通常會利用利用一些交聯劑對其進行交聯，隨后制備形成凝膠單相或凝膠-游離雙相的產品。

在傳統的交聯工藝中，為了保證交聯效率，通常采用大當量的化學交聯劑，如1,4-丁二醇二縮水甘油醚(BDDE)及二乙烯基砜(DVS)等。在交聯反應完成后，殘留的交聯劑去除較為困難，且對人體有一定毒性。目前使用的工藝為透析或清洗，且由于交聯度不一，清洗時低交聯的透明質酸分子易流失。此外，由于交聯劑與透明質酸分子交聯反應的不可控性，其在機體內的穩定時間的增長有限。

美國發明公開第2005/0281880A1號揭示一種可注射凝膠的制備方法，其步驟包含：在一個密閉容器內，交聯一種或多種聚合物形成膠體；清洗所述膠體；純化所述膠體；均質所述膠體形成凝膠。所述方法使用了高濃度雙官能團或多官能團交聯劑，有上述鍵結態交聯劑殘留的問題。再者，膠體清洗、純化的時間需2至3天，由于此時溶液的酸堿值已接近中性，產生微生物污染的風險。

美國發明公開第2006/0194758A1號將高、低分子量的透明質酸混合反應，產生一種單相的具良好機械性質的膠體，改良了可注射性，但此方法在50℃交聯反應結束后，未經透析純化前殘留大量未反應的交聯劑，其濃度超過300ppm以上，之后通過透析法以純化試圖去除交聯劑，但其效果不佳，難以有效去除未反應且自由態的交聯劑，也無法去除已為鍵結狀態但交聯劑的另一端尚具自由態官能團的交聯劑。

美國發明公開第2007/0026070A1號揭示了一種多糖交聯凝膠的方法，包括在堿性溶液中，使多糖與二或多官能團環氧化物接觸，以提供一種以環氧化物交聯的多糖，其中環氧化物基本上是以醚鍵與多糖聯結；在實質上未從堿性介質中移除環氧化物的情況下，干燥所述環氧化物交聯的多糖；以水可溶的溶劑合理清洗交聯的多糖；中和交聯的多糖基質，形成交聯的多糖凝膠。此方法同樣具有已是鍵結狀態但尚含自由態官能團的交聯劑殘留問題。

中國專利ZL 200810172328公開了一種制造交聯透明質酸的方法，其包含在約10℃至約30℃的低反應溫度，使包含交聯劑與透明質酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物的溶液在堿性環境進行交聯反應超過約48小時。該方法存在交聯劑用量大、反應效率低、產物中透明質酸含量低等缺陷。

目前已有的相關專利及文獻中所采用的化學交聯法都有一定的缺陷，如大當量交聯劑難以去除，反應效率難以控制，穩定性不夠強等。

發明內容