[發明專利]分離并檢測米諾膦酸的方法

在審

• 申請號: 201610460467.3
• 申請日: 2016-06-23
• 公開（公告）號: CN107543865A
• 公開（公告）日: 2018-01-05
• 發明（設計）人: 嚴潔;王志鳳
• 申請（專利權）人: 天津市漢康醫藥生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本申請涉及藥物的分離及檢測方法，特別是涉及分離并檢測米諾膦酸方法。

背景技術

米諾膦酸片由日本小野藥品工業株式會社和日本Astellas制藥株式會社共 同研發，2009年1月在日本厚生省上市，可作為治療骨質疏松癥的一線用藥， 相比第三代二磷酸鹽阿侖膦酸，米諾膦酸具有相似的療效，但是使用劑量則明顯 下降(阿侖膦酸為10mg/day，米諾膦酸為1mg/day)，提高了患者的順從性和減 少了二磷酸鹽常見胃腸不良反應。

現有技術中針對米諾膦酸的檢測條件存在雜質分離度不好，雜質峰數量檢測出較少，理論板數低，不能準確評估米諾膦酸的質量，數據缺乏真實性、準確性。

發明內容

本申請的一方面涉及分離并檢測米諾膦酸的方法，所述方法通過高效液相色譜法采用線性梯度洗脫方式對米諾膦酸進行分離并檢測，其中實施高效液相色譜法的條件為：高效液相色譜儀所用的色譜柱為反相色譜柱，流動相A為含有烷基磺酸鈉的pH=2~7.5 的緩沖液，流動相B為甲醇或乙腈，檢測波長為215nm。

在本申請的分離并檢測米諾膦酸的方法中，可以通過下列步驟制備待測樣品：將米諾膦酸溶于甲醇或乙腈中以制成 待測樣品的混合溶液，在實施分離與檢測時，可以將2~50μl的待測樣品的混合溶液注入高效液相色譜儀中，以實施對米諾膦酸分離與檢測。

在本申請中所述反相色譜柱中使用的填充劑為烷基硅烷的化學鍵合硅膠，其中烷基的鏈長可以是C2、C4、C6、C8、C16、 C18和C22等。所述烷基硅烷的化學鍵合硅膠優選為十八烷基硅烷鍵合硅 膠或辛烷基硅烷鍵合硅膠，更優選為十八烷基硅烷鍵合硅膠。

本申請中所述的烷基磺酸鹽，例如， 甲烷磺酸鹽、戊烷磺酸鹽、己烷磺酸鹽、庚烷磺酸鹽、辛烷磺酸鹽、 癸烷磺酸鹽、十二烷基磺酸鹽和樟腦磺酸鹽等，優選烷基磺酸的鈉鹽 （R-SO₃Na），更優選C5-C10烷基磺酸的鈉鹽，甚至更優選庚烷磺酸鈉、 辛烷磺酸鈉和癸烷磺酸鈉，最優選癸烷磺酸鈉。

在本申請的分離并檢測米諾膦酸的方法中使用的流動相A的pH值在2.0-7.5之間，優選為2.0-6.0，更 優選為2.0-3.0，最優選為2.5。

在本申請中所述流動相A中所述烷基磺酸鹽的濃度為1000ml水含0.2g-4.0g烷基磺酸鹽。

在本申請中所述流動相A中，所用的緩沖液為磷酸鹽緩沖液優選磷酸二氫鈉。

在本申請的某些實施方案中，通過如下方法配制所述烷基磺酸鈉的緩沖液：將0.8g～8.0g緩沖鹽與0.2g～4.0g烷基磺酸鈉混合，加水 1000ml溶解，并調節pH值為2.0-7.5。優選地，將0.8g～4.0g緩沖鹽與0.6g～ 2.0g烷基磺酸鈉混合，加水1000ml溶解，并調節pH值為2.0-6.0來配制本文 所述方法中使用的緩沖液。更優選地，將1.6g緩沖鹽與烷基磺酸鈉1.2g混 合，加水1000ml溶解，并調節pH值為2.5來配制本文所述方法中使用的緩沖液。

在本申請中，采用A、B兩相進行所述線性梯度洗脫， 按體積百分比計算，A%+B%=100%，所述線性梯度洗脫方式為0~8min， A%由60~80%變為35~40%，8~25min，A%保持35~40%，25.01min，A% 由35~40%變為60~80%，25.01~40min，A%保持60~80%。

優選地，采用A、B兩相進行所述線性梯度洗脫， 按體積百分比計算，A%+B%=100%，所述線性梯度洗脫方式優選為 0~8min，A%由80%變為40%，8~25min，A%保持40%，25.01min，A%由 40%變為80%，25.01~40min，A%保持80%。

在本申請的某些實施方案中，所述流動相B為甲醇和乙腈，優選甲醇。

在本申請的某些實施方案中，所述方法中使用的高效液相色譜柱的 柱溫為20℃-35℃，優選為25℃-35℃，更優選為30℃。

在本申請的某些實施方案中，所述方法中使用的高效液相色譜柱的 流速為0.6~1.2ml/min，優選為0.8~1.2ml/min，更優選為1.0ml/min。

此外，本領域所屬技術人員能夠理解，所述柱溫和流速不必局限于上述溫度和流速，可以根據實踐的需要選擇合適的柱溫和流速，只要其能夠有效地分離并檢測出米諾膦酸。

本申請的另一方面涉及本申請的分離并檢測米諾膦酸的方法在含有米諾膦酸的藥品的質量控制和質量檢測中的用途。