[發明專利]獲得病毒的方法在審
| 申請號： | 201610458702.3 | 申請日： | 2016-06-22 |
| 公開（公告）號： | CN107523555A | 公開（公告）日： | 2017-12-29 |
| 發明（設計）人： | 王學海;馬梵辛;許勇;任科云;葉煒;陳艷;袁宏麗;何昆;田呂明;黃璐;劉哲;肖強 | 申請（專利權）人： | 武漢光谷人福生物醫藥有限公司;武漢珂美立德生物醫藥有限公司;湖北生物醫藥產業技術研究院有限公司;人福醫藥集團股份公司 |
| 主分類號： | C12N7/00 | 分類號： | C12N7/00 |
| 代理公司： | 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙)11201 | 代理人： | 李志東 |
| 地址： | 430075 湖北省武漢市東湖高新技*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 獲得 病毒 方法 | ||
1.一種獲得病毒的方法，其特征在于，包括：
利用病毒種子感染宿主細胞，所述宿主細胞為HEK293細胞，且所述宿主細胞為懸浮培養在無血清培養基中的宿主細胞；以及
將感染后的宿主細胞繼續進行懸浮培養，以便獲得病毒，
其中，在進行所述感染時，所述病毒種子的病毒感染復數為10～50，所述宿主細胞在所述無血清培養基中的濃度為1.0～3.0×106cells/ml。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述宿主細胞在所述無血清培養基中的接種密度為3.0～5.0×105cells/ml。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將感染后的宿主細胞繼續進行懸浮培養24～48h，以便獲得病毒。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，將感染后的宿主細胞繼續進行懸浮培養24～48h的過程中，葡萄糖在所述無血清培養基中的濃度為2～5g/L。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述病毒為腺病毒、慢病毒或逆轉錄病毒。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述無血清培養基為Gibco CD293 AGTTM/AEM,Hyclone CDM4/SFM4/PF-293*/SFM Transfx。
7.一種獲得病毒的方法，其特征在于，包括：
1)HEK293細胞種子接種到生物反應器的無血清培養基Gibco CD293 AGTTM/AEM,Hyclone CDM4/SFM4/PF-293*/SFM Transfx中，接種密度為3.0～5.0×105cells/ml，并繼續在生物反應器中進行懸浮培養；
2)當HEK293密度達到1.0～3.0×106cells/ml時，用腺病毒種子以病毒感染復數為10～50直接感染細胞并繼續進行懸浮培養，葡萄糖的濃度控制在2～5g/L；
3)通過監測接毒后生物反應器內培養的細胞活率，當感染后24～48h，結束培養，分別收集細胞及培養上清，以便獲得腺病毒。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述HEK293細胞種子預先復蘇并擴增培養在無血清培養基中，HEK293細胞種子的復蘇密度為3.0～5.0×105cells/ml，當生長到2.0～4.0×106cells/ml左右時，以細胞密度為3.0～5.0×105cells/ml進行擴增培養。
9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，進一步包括對所獲得的腺病毒進行純化。
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