[發明專利]一種醋酸格拉替雷制備過程中哌啶殘留量的實時控制方法

有效

• 申請號: 201610458258.5
• 申請日: 2016-06-22
• 公開（公告）號: CN107522774B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 李國弢;鄧興建;唐洋明;陶安進;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;G01N30/02;G01N30/96
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 郎堅

本發明提供了一種醋酸格拉替雷制備過程中哌啶殘留量的實時控制方法，以超濾方法對格拉替雷粗品溶液進行純化，同時監測pH值至9.9?10.0時停止純化，酸化以獲得哌啶殘留量低于0.1％(0.05％，更優選0.03％)的醋酸格拉替雷。本發明的方法能夠使醋酸格拉替雷產品中的哌啶殘留量降低，純化時間縮短。

技術領域

本發明涉及一種多肽藥物的制備方法，具體涉及一種醋酸格拉替雷制備過程中哌啶殘留量的實時控制方法

背景技術

醋酸格拉替雷是一種用于治療多發性硬化癥的的人工合成多肽混合物(M.M.Mouradain,PharmacologyTherapeutics,98,245-255,2003)。醋酸格拉替雷(又叫共聚物-1)是一個由丙氨酸、谷氨酸、賴氨酸和酪氨酸組成的隨機聚合物。它的氨基酸摩爾比大約是0.392～0.462:0.129～0.153:0.300～0.374:0.086～0.100，平均分子量大約4700～11000道爾頓。醋酸格拉替雷的結構式是：

(Glu,Ala,Lys,Tyr)_x·xCH₃COOH

醋酸格拉替雷或共聚物-1的合成方法已經在美國專利3849550，5800808，5981589，48898，6054430，6342476，6362161等專利中描述。合成方法是通過L-丙氨酸、L-酪氨酸、L-谷氨酸-γ-芐酯、L-ε-三氟乙酰基-賴氨酸的N-甲酸酐(NCA)在無水1,4-二氧六環中，使用二乙胺引發進行隨機聚合，以產生受保護的多肽。γ-芐基基團的脫保護是通過室溫下在溴化氫/乙酸中攪拌受保護的多肽來實現的。該條件也可以切割共聚物。下一步通過哌啶處理可以脫除ε-三氟乙酰基。最后通過超濾技術純化共聚物并凍干，得到醋酸格拉替雷。因此，現有技術包括：聚合、兩次去保護、純化和凍干步驟。

哌啶在《聯合國禁止非法販運麻醉藥品和精神藥物公約》中出現在表2中，其被歸屬為麻醉藥品和精神藥品的前體，所以其生物活性不容小視。哌啶在醋酸格拉替雷的合成過程中的最后一步化學反應中，被用作脫除賴氨酸殘基上的-三氟乙酰基的脫除劑，所以醋酸格拉替雷產品中哌啶的殘留量就成為了很重要的一個質量指標。在醋酸格拉替雷原研廠家——以色列梯瓦公司發表的文獻中沒有有關控制醋酸格拉替雷中哌啶的方法報道。

因為合成醋酸格拉替雷的最后一步化學反應是用哌啶脫除三氟乙酰基格拉替雷中賴氨酸殘基上的ε-三氟乙酰基，然后進行純化和凍干操作。而哌啶的沸點達到了106℃，在凍干環節很難除去。所以純化環節就成了唯一可能去除殘留哌啶，使其維持一個可以接受范圍內的機會。

本發明的目的就是通過純化環節在線檢測哌啶的殘留量，使產品醋酸格拉替雷中哌啶的殘留量低于0.10％

發明內容

為了克服上述問題，本發明提供了一種醋酸格拉替雷的制備方法，其包括以下步驟：

1)合成全保護的格拉替雷，

2)脫除除賴氨酸側鏈保護基以外的其他保護基，得到三氟乙酰基格拉替雷，

3)以哌啶水溶液脫除三氟乙酰基，得到格拉替雷粗品溶液；

4)以超濾方法對格拉替雷粗品溶液進行純化，同時監測pH值至9.9-10.0時停止純化，并加醋酸至pH值5.5-5.8；

5)凍干步驟4)所得溶液，獲得哌啶殘留量低于0.1％(0.05％，更優選0.03％)的醋酸格拉替雷。

其中，步驟4)中還包括了以氣相色譜法和/或離子色譜法輔助實時檢測哌啶殘留量的步驟。

其中，