[發明專利]熒光探針的制備方法及基于熒光探針的土霉素檢測方法

有效

• 申請號: 201610451659.8
• 申請日: 2016-06-21
• 公開（公告）號: CN105884806B
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 許小平;胥智群;歐敏銳;祝令輝;谷俊杰
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C07F5/02
• 分類號: C07F5/02;C09K11/06;C09B57/00;G01N21/64
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司35211
• 代理人: 戴雨君

1.一種基于熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于：所述熒光探針由以下方法制備而成：

（1）稱取吡咯和戊二酸酐溶于適量二氯甲烷中，得到混合物，然后迅速將混合物加入到三口燒瓶中，在N₂保護下，向三口燒瓶中逐滴加入三氟化硼乙醚絡合物，于常溫下充分攪拌，反應8-9小時；

所述吡咯、戊二酸酐、三氟化硼乙醚絡合物的摩爾比為2：1：6-8；

（2）在冰浴的環境下，向三口燒瓶中緩緩加入三乙胺，攪拌3.5-4小時后停止反應；

所加入的三乙胺與三氟化硼乙醚絡合物的摩爾比為1：1-1.25；

（3）將上述步驟得到的反應液用石油醚和二氯甲烷的混合溶液萃取3次，收集黃綠色溶液，所述石油醚和二氯甲烷的體積比為2-2.5:1；

（4）將萃取得到黃綠色溶液旋轉蒸發濃縮，收集固體，所述固體用硅膠柱層析分離，收集亮綠色溶液并旋轉蒸發濃縮，收集固體并干燥后，得到熒光探針；

基于所述熒光探針的土霉素檢測方法包括以下步驟：

1）繪制標準工作曲線：制備系列不同濃度的土霉素標準溶液，取若干支試管，分為空白熒光對照組和實驗組，所有試管中加入磷酸鹽緩沖溶液和熒光探針，然后向實驗組的試管中加入不同濃度的土霉素標準溶液，空白熒光對照組不加土霉素標準溶液，測定所有試管中溶液的熒光強度；

空白熒光對照組的熒光強度為F₀，實驗組的熒光強度為F，計算減弱的熒光強度△FI= F₀- F，以不同的土霉素的濃度C₀與對應減弱的熒光強度△FI作圖，繪制標準工作曲線；

2）測定樣品中土霉素濃度：按照步驟1）的方法，向試管中加入磷酸鹽緩沖溶液和熒光探針，然后向試管中加入待檢測樣品，測定試管中加入樣品前后溶液的熒光強度并計算變化值，將檢測結果與標準工作曲線對比，推算出待檢測樣品中土霉素含量。

2.根據權利要求1所述的基于熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于：熒光探針制備過程，所述硅膠柱層析分離采用的淋洗劑為甲醇和二氯甲烷的混合液，所述甲醇和二氯甲烷的體積比為1:3-4。

3.根據權利要求1所述的基于熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于：熒光探針制備過程，所述步驟（4）的干燥方法為真空干燥。

4.根據權利要求1所述的基于熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于：土霉素檢測過程，熒光強度測定參數為：激發光狹縫為1.5nm，發射光狹縫為1.5nm，激發光波長為358nm。

5.根據權利要求1所述的基于熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于：土霉素檢測過程，加入土霉素標準溶液或待檢測樣品8-10min后再測定熒光強度。

6. 根據權利要求1所述的基于熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于：土霉素檢測過程，所述熒光探針與磷酸鹽緩沖溶組成的混合物中，熒光探針的摩爾濃度為1. 0×10^-5mol /L。

7.根據權利要求1所述的基于熒光探針的土霉素檢測方法，其特征在于：土霉素檢測過程，所述熒光探針與磷酸鹽緩沖溶組成的混合物中，磷酸鹽緩沖溶液的摩爾濃度為10-15mmol/L，pH=7.0。