[發(fā)明專利]一種牛耳楓組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610440880.3
• 申請日: 2016-06-20
• 公開（公告）號: CN106069757B
• 公開（公告）日: 2018-04-10
• 發(fā)明（設計）人: 陳媚;韓麗娜;唐躍東;李敬陽;覃和業(yè);郭慶輝;劉以道
• 申請（專利權(quán)）人: 熱作兩院種苗組培中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司44218
• 代理人: 李平

1.一種牛耳楓組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)消毒處理：選用成熟、飽滿、無病蟲害的牛耳楓種子，去皮，清洗，消毒；

(2)初代培養(yǎng)：將步驟(1)處理后的外植體切開，剝?nèi)⊥暾呓臃N到初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到無菌小苗，其中，所述初代培養(yǎng)基為添加有0.1～1.0mg/L的6-BA和0.05～0.1mg/L的NAA的MS培養(yǎng)基；

(3)繼代培養(yǎng)：無菌小苗切去根部后轉(zhuǎn)接入繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)30～35d，其中，所述繼代培養(yǎng)基為添加有1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.5mg/L的NAA的WPM培養(yǎng)基；

(4)壯苗培養(yǎng)：將分化的小苗轉(zhuǎn)接到壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)25～35d，其中，所述壯苗培養(yǎng)基為添加有0.1～1.0mg/L的6-BA、0.01～0.1mg/L的NAA、20～40g/L的蔗糖和5～8g/L卡拉膠的MS培養(yǎng)基；

(5)生根培養(yǎng)：將小苗切成單株，接種至生根培養(yǎng)基中誘導根的發(fā)育，得到生根苗，其中，所述生根培養(yǎng)基為添加有1.0～5.0mg/L的IBA、0.5～3.0mg/LNAA和20～40g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基；

(6)煉苗及移栽：生根苗置于室溫下經(jīng)7～10d的自然光煉苗，然后洗凈根部培養(yǎng)基，移栽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛耳楓組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(2)中所述初代培養(yǎng)基為添加有0.5～1.0mg/L的6-BA和0.05～0.1mg/L的NAA的MS培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牛耳楓組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(2)中所述初代培養(yǎng)基為添加有1.0mg/L的6-BA和0.1mg/L的NAA的MS培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛耳楓組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(3)中所述繼代培養(yǎng)基為添加有1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.2mg/L的NAA的WPM培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的牛耳楓組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(3)中所述繼代培養(yǎng)基為添加有2.0mg/L的6-BA和0.2mg/L的NAA的WPM培養(yǎng)基。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛耳楓組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(4)中所述壯苗培養(yǎng)基為添加有0.5mg/L的6-BA、0.05的NAA、30g/L的蔗糖和6g/L卡拉膠的MS培養(yǎng)基。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛耳楓組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(5)中所述生根培養(yǎng)基為添加有3.0mg/L的IBA、1.0mg/LNAA和25g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛耳楓組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(2)中培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度25～27℃，光強1300-1500Lux，每天光照9～10h；步驟(3)和步驟中培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度25～27℃，光強1700-2000Lux，每天光照9～10h；步驟(4)中培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度25～27℃，光強1700-2000Lux，每天光照9～10h；步驟(5)中培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度27～29℃，光強1800～2200Lux，每天光照11～12h。

9.一種用于牛耳楓組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基組，其特征在于，所述培養(yǎng)基組包括初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，其中，

所述初代培養(yǎng)基為添加有0.1～1.0mg/L的6-BA和0.05～0.1mg/L的NAA的MS培養(yǎng)基；

所述繼代培養(yǎng)基為添加有1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.5mg/L的NAA的WPM培養(yǎng)基；

所述壯苗培養(yǎng)基為添加有0.1～1.0mg/L的6-BA、0.01～0.1mg/L的NAA、20～40g/L的蔗糖和5～8g/L卡拉膠的MS培養(yǎng)基；

所述生根培養(yǎng)基為添加有1.0～5.0mg/L的IBA、0.5～3.0mg/LNAA和20～40g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的培養(yǎng)基組，其特征在于，所述初代培養(yǎng)基為添加有0.5～1.0mg/L的6-BA和0.05～0.1mg/L的NAA的MS培養(yǎng)基；

所述繼代培養(yǎng)基為添加有1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.2mg/L的NAA的WPM培養(yǎng)基；

所述壯苗培養(yǎng)基為添加有0.5mg/L的6-BA、0.05的NAA、30g/L的蔗糖和6g/L卡拉膠的MS培養(yǎng)基；

所述生根培養(yǎng)基為添加有3.0mg/L的IBA、1.0mg/LNAA和25g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基。