[發(fā)明專利]一種牛耳楓組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610440880.3
• 申請日: 2016-06-20
• 公開（公告）號: CN106069757B
• 公開（公告）日: 2018-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳媚;韓麗娜;唐躍東;李敬陽;覃和業(yè);郭慶輝;劉以道
• 申請（專利權(quán)）人: 熱作兩院種苗組培中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司44218
• 代理人: 李平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種牛耳楓組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

牛耳楓(拉丁學(xué)名：Daphniphyllum calycinum Benth.)別稱：鈴豬肚、豬肚果、豬肚木、豬肚子、豬洛木、豬絡(luò)木、豬仔木、珠碌子、山羊屎、羊屎子、老虎耳、土鴉膽子、大耳梳、南嶺虎楠、南嶺虎皮楠及嶺南虎皮楠。其為虎皮楠科虎皮楠屬植物，常綠灌木或小喬木植物，高約1～6米，小枝灰褐色，具稀疏的皮孔及葉痕，直徑約3～5毫米。產(chǎn)廣西、廣東、福建、江西等省區(qū)；生于海拔250～700米的疏林或灌叢中，在越南和日本也有分布。

牛耳楓種子榨油可制肥皂或作潤滑油，而且其種子可治慢性痢疾(《南寧市藥物志》)；其枝葉具有祛風(fēng)止痛、解毒消腫的作用，主風(fēng)濕骨痛、瘡瘍腫毒、跌打骨折、毒蛇咬傷等(《陸川本草》：驅(qū)風(fēng)，止痛，消腫。治風(fēng)濕骨痛，浮腫；《南寧市藥物志》：治跌打后遺筋縮)；其根具有清熱解毒、活血化瘀、消腫止痛的作用，主外感發(fā)熱、咳嗽、咽喉腫痛、脅下痞塊、風(fēng)濕骨痛、跌打損傷。牛耳楓具有很高的醫(yī)用價值，研究者們對其的研究也越來越多。例如CN102988565A、CN102698204A、CN102258583A等多篇專利文獻(xiàn)均公開了含有牛耳楓的藥物制劑，而且市場上已出現(xiàn)牛耳楓與辣蓼配伍的楓蓼腸胃康顆粒，用于急性胃腸炎，屬傷食泄瀉型及濕熱泄瀉型者，癥見腹痛腹?jié)M、泄瀉臭穢、惡心嘔腐或有發(fā)熱惡寒苔黃脈數(shù)等，亦可用于食滯胃痛而癥見胃脘痛、拒按、惡食欲吐、噯腐吞酸、舌苔厚膩或黃膩脈滑數(shù)者?？梢灶A(yù)期牛耳楓的應(yīng)用將會越來越廣泛。

但是目前關(guān)于牛耳楓種子萌發(fā)和培養(yǎng)技術(shù)的研究極少。由于牛耳楓種子的發(fā)芽率普遍較低，采用常規(guī)的種子繁殖方法速度慢。組織培養(yǎng)技術(shù)具有繁殖速度快、繁殖系數(shù)大，繁殖后代整齊一致，能保持原有品種的優(yōu)良性狀，不受季節(jié)的限制等優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用各種觀賞植物中，目前尚未見有應(yīng)用于牛耳楓上。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種牛耳楓組織培養(yǎng)方法，解決了牛耳楓因種子發(fā)芽率較低而繁殖速度慢的問題。本發(fā)明的方法用于牛耳楓快速繁殖，具有繁殖速度快、繁殖系數(shù)大，繁殖后代整齊一致，移栽成活率高的優(yōu)點。

本發(fā)明的第一個方面是提供一種牛耳楓組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

(1)消毒處理：選用成熟、飽滿、無病蟲害的牛耳楓種子，去皮，清洗，消毒；

(2)初代培養(yǎng)：將步驟(1)處理后的外植體切開，剝?nèi)⊥暾呓臃N到初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到無菌小苗，其中，所述初代培養(yǎng)基為添加有0.1～1.0mg/L的6-BA和0.05～0.1mg/L的NAA的MS培養(yǎng)基；

(3)繼代培養(yǎng)：無菌小苗切去根部后轉(zhuǎn)接入繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)30～35d，其中，所述繼代培養(yǎng)基為添加有1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.5mg/L的NAA的WPM培養(yǎng)基；

(4)壯苗培養(yǎng)：將分化的小苗轉(zhuǎn)接到壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)25～35d，其中，所述壯苗培養(yǎng)基為添加有0.1～1.0mg/L的6-BA、0.01～0.1mg/L的NAA、20～40g/L的蔗糖和5～8g/L卡拉膠的MS培養(yǎng)基；

(5)生根培養(yǎng)：將小苗切成單株，接種至生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)根的發(fā)育，得到生根苗，其中，所述生根培養(yǎng)基為添加有1.0～5.0mg/L的IBA、0.5～3.0mg/LNAA和20～40g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基；

(6)煉苗及移栽：生根苗置于室溫下經(jīng)7～10d的自然光煉苗，然后洗凈根部培養(yǎng)基，移栽。

優(yōu)選地，步驟(2)中所述初代培養(yǎng)基為添加有0.5～1.0mg/L的6-BA和0.05～0.1mg/L的NAA的MS培養(yǎng)基。

進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(2)中所述初代培養(yǎng)基為添加有1.0mg/L的6-BA和0.1mg/L的NAA的MS培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，步驟(3)中所述繼代培養(yǎng)基為添加有1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.2mg/L的NAA的WPM培養(yǎng)基。

進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(3)中所述繼代培養(yǎng)基為添加有2.0mg/L的6-BA和0.2mg/L的NAA的WPM培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，步驟(4)中所述壯苗培養(yǎng)基為添加有0.5mg/L的6-BA、0.05的NAA、30g/L的蔗糖和6g/L卡拉膠的MS培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，步驟(5)中所述生根培養(yǎng)基為添加有3.0mg/L的IBA、1.0mg/LNAA和25g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基。