[發明專利]一種豬肺炎支原體的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201610436792.6
• 申請日: 2016-06-17
• 公開（公告）號: CN107513507A
• 公開（公告）日: 2017-12-26
• 發明（設計）人: 田克恭;翟路峰;孫進忠;張許科
• 申請（專利權）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/35
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙)11017
• 代理人: 韓登營

1.一種豬肺炎支原體的制備方法，其中，所述豬肺炎支原體的制備方法包括：

步驟(1)使用液體培養基擴增培養豬肺炎支原體或其培養物進入穩定期；

步驟(2)調節所述處于穩定期的液體培養基pH值為7.2-7.6；以及

步驟(3)繼續培養所述豬肺炎支原體至液體培養基pH值為6.8-7.0。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其中，所述步驟(1)中所述擴增培養豬肺炎支原體或其培養物進入穩定期時所述液體培養基pH值下降為6.8-7.0。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其中，所述步驟(2)中調節所述處于穩定期的液體培養基pH值為7.4。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其中，所述步驟(3)中繼續培養所述豬肺炎支原體0.5天以上；優選地，所述步驟(3)中繼續培養所述豬肺炎支原體0.5天-2天。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其中，所述步驟(1)中使用液體培養基擴增培養所述豬肺炎支原體或其培養物為多級培養；優選地，所述步驟(1)中使用液體培養基擴增培養所述豬肺炎支原體或其培養物為三級培養。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其中，使用液體培養基擴增培養所述豬肺炎支原體或其培養物制備一級種子的菌種接種量為5％-15％，所述制備一級種子的培養完成時液體培養基pH值為6.8-7.0，制備二級種子的一級種子接種量為3％-8％，所述制備二級種子的培養完成時液體培養基pH值為6.8-7.0，使用二級種子擴增豬肺炎支原體的接種量為3％-8％，所述擴增豬肺炎支原體的培養完成時液體培養基pH值為6.8-7.0；優選地，使用液體培養基擴增培養所述豬肺炎支原體或其培養物制備一級種子的菌種接種量為10％，制備一級種子的培養時間為3-7天，制備二級種子的一級種子接種量為5％，制備二級種子的培養時間為3-7天，使用二級種子擴增豬肺炎支原體的接種量為5％，擴增豬肺炎支原體的的培養時間為3-7天。

7.一種疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物包括免疫量的權利要求1～5任一項所述制備方法制備的豬肺炎支原體的抗原和藥學上可接受的載體。

8.根據權利要求7所述的疫苗組合物，其中，所述豬肺炎支原體的抗原包括滅活的全支原體抗原和裂解的支原體抗原；優選地，所述豬肺炎支原體的抗原包括所述豬肺炎支原體HN0613株或GZ株滅活的全支原體抗原和裂解的支原體抗原；優選地，所述豬肺炎支原體的抗原含量為滅活前≥10^7.0CCU/ml，更優選地含量為10^7.0～10^10.0CCU/ml。