[發(fā)明專利]一種豬肺炎支原體的制備方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610436792.6
• 申請日: 2016-06-17
• 公開（公告）號: CN107513507A
• 公開（公告）日: 2017-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 田克恭;翟路峰;孫進(jìn)忠;張許科
• 申請（專利權(quán)）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/35
• 代理公司: 北京華夏正合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11017
• 代理人: 韓登營

1.一種豬肺炎支原體的制備方法，其中，所述豬肺炎支原體的制備方法包括：

步驟(1)使用液體培養(yǎng)基擴(kuò)增培養(yǎng)豬肺炎支原體或其培養(yǎng)物進(jìn)入穩(wěn)定期；

步驟(2)調(diào)節(jié)所述處于穩(wěn)定期的液體培養(yǎng)基pH值為7.2-7.6；以及

步驟(3)繼續(xù)培養(yǎng)所述豬肺炎支原體至液體培養(yǎng)基pH值為6.8-7.0。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，所述步驟(1)中所述擴(kuò)增培養(yǎng)豬肺炎支原體或其培養(yǎng)物進(jìn)入穩(wěn)定期時所述液體培養(yǎng)基pH值下降為6.8-7.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，所述步驟(2)中調(diào)節(jié)所述處于穩(wěn)定期的液體培養(yǎng)基pH值為7.4。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，所述步驟(3)中繼續(xù)培養(yǎng)所述豬肺炎支原體0.5天以上；優(yōu)選地，所述步驟(3)中繼續(xù)培養(yǎng)所述豬肺炎支原體0.5天-2天。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，所述步驟(1)中使用液體培養(yǎng)基擴(kuò)增培養(yǎng)所述豬肺炎支原體或其培養(yǎng)物為多級培養(yǎng)；優(yōu)選地，所述步驟(1)中使用液體培養(yǎng)基擴(kuò)增培養(yǎng)所述豬肺炎支原體或其培養(yǎng)物為三級培養(yǎng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其中，使用液體培養(yǎng)基擴(kuò)增培養(yǎng)所述豬肺炎支原體或其培養(yǎng)物制備一級種子的菌種接種量為5％-15％，所述制備一級種子的培養(yǎng)完成時液體培養(yǎng)基pH值為6.8-7.0，制備二級種子的一級種子接種量為3％-8％，所述制備二級種子的培養(yǎng)完成時液體培養(yǎng)基pH值為6.8-7.0，使用二級種子擴(kuò)增豬肺炎支原體的接種量為3％-8％，所述擴(kuò)增豬肺炎支原體的培養(yǎng)完成時液體培養(yǎng)基pH值為6.8-7.0；優(yōu)選地，使用液體培養(yǎng)基擴(kuò)增培養(yǎng)所述豬肺炎支原體或其培養(yǎng)物制備一級種子的菌種接種量為10％，制備一級種子的培養(yǎng)時間為3-7天，制備二級種子的一級種子接種量為5％，制備二級種子的培養(yǎng)時間為3-7天，使用二級種子擴(kuò)增豬肺炎支原體的接種量為5％，擴(kuò)增豬肺炎支原體的的培養(yǎng)時間為3-7天。

7.一種疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物包括免疫量的權(quán)利要求1～5任一項所述制備方法制備的豬肺炎支原體的抗原和藥學(xué)上可接受的載體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的疫苗組合物，其中，所述豬肺炎支原體的抗原包括滅活的全支原體抗原和裂解的支原體抗原；優(yōu)選地，所述豬肺炎支原體的抗原包括所述豬肺炎支原體HN0613株或GZ株滅活的全支原體抗原和裂解的支原體抗原；優(yōu)選地，所述豬肺炎支原體的抗原含量為滅活前≥10^7.0CCU/ml，更優(yōu)選地含量為10^7.0～10^10.0CCU/ml。