[發(fā)明專利]一種酶法檢測(cè)羧酸酯酶2的試劑盒及其使用方法與應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610417162.4
• 申請(qǐng)日: 2016-06-14
• 公開（公告）號(hào): CN107502652A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊凌;葛廣波;金強(qiáng);王丹丹;于洋;杜遜甫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/44
• 分類號(hào): C12Q1/44
• 代理公司: 沈陽晨創(chuàng)科技專利代理有限責(zé)任公司21001
• 代理人: 張晨

1.一種酶法檢測(cè)羧酸酯酶2的試劑盒，其特征在于該試劑盒包括4種試劑：試劑I、試劑II、試劑III和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；

所述試劑I為100mM磷酸鹽緩沖液，pH＝7～10；

所述試劑II為0.1～10mM的1,3-二氯-7-羥基-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮的苯甲酰酯溶液，溶劑為甲醇、乙腈、二甲基亞砜中任意一種；

所述試劑III為終止劑，為乙腈或甲醇；

所述質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品為5mg/ml的羧酸酯酶2水溶液。

2.按照權(quán)利要求1所述的一種酶法檢測(cè)羧酸酯酶2的試劑盒的使用方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)預(yù)孵育：在總體積為V₀的反應(yīng)體系中，將待測(cè)樣品與試劑I混勻，20～60℃下孵育3～5分鐘,待測(cè)樣品終濃度為0-10μg/mL；

(2)起始反應(yīng)：加入試劑II混勻，試劑II的終濃度5μM，20～60℃下孵育5-20分鐘；

(3)終止反應(yīng)：加入體積數(shù)為V₀的試劑III，劇烈震蕩10秒；

(4)檢測(cè)：離心后取上清于酶標(biāo)儀或全自動(dòng)生化儀檢測(cè)熒光值，檢測(cè)條件為：激發(fā)波長600nm，發(fā)射波長662nm；或測(cè)646nm處的吸光值；

(5)回算：取熒光值代入到標(biāo)準(zhǔn)曲線后計(jì)算樣品中羧酸酯酶2含量。

3.按照權(quán)利要求2所述酶法檢測(cè)羧酸酯酶2的試劑盒的使用方法，其特征在于所述待測(cè)樣品為：重組表達(dá)的人源或動(dòng)物的羧酸酯酶2單酶、含有羧酸酯酶2的細(xì)胞或組織制備液、動(dòng)物活組織切片、活細(xì)胞等生物體系。

4.按照權(quán)利要求1所述的一種酶法檢測(cè)羧酸酯酶2的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，該試劑盒用于羧酸酯酶2活性的快速定量檢測(cè)，以及該酶抑制劑的快速篩選與評(píng)估。

5.按照權(quán)利要求4所述酶法檢測(cè)羧酸酯酶2的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于：該試劑盒用于羧酸酯酶2活性的快速定量檢測(cè)的方法為：按照試劑盒的使用方法，通過定量檢測(cè)單位時(shí)間內(nèi)底物的消除量以及水解產(chǎn)物的生成量來測(cè)定不同樣本中羧酸酯酶2的活性。

6.按照權(quán)利要求4所述酶法檢測(cè)羧酸酯酶2的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于：該試劑盒用于羧酸酯酶2抑制劑的快速篩選與評(píng)估方法為：按照試劑盒的使用方法，通過定量比較抑制劑存在與缺失狀態(tài)下單位時(shí)間內(nèi)水解產(chǎn)物的生成量評(píng)估該生物體系中CE2的殘余活性，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)CE2抑制劑的快速篩選及抑制能力的定量評(píng)價(jià)。