[發明專利]一種他克莫司浸提方法

有效

• 申請號: 201610411370.3
• 申請日: 2016-06-10
• 公開（公告）號: CN106046023B
• 公開（公告）日: 2018-03-20
• 發明（設計）人: 張貴民;李建濤;孫穎;馬魯南
• 申請（專利權）人: 山東新時代藥業有限公司
• 主分類號: C07D498/18
• 分類號: C07D498/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫藥生物技術領域，特別涉及一種他克莫司浸提方法。

背景技術

他克莫司是微生物的次級代謝產物，具有選擇性較好的強免疫抑制作用，主要用于器官移植后的抗排斥用藥，他克莫司和孢菌素A的發現極大推動了器官移植的發展。

他克莫司由日本藤澤公司研發，作用機制和環孢菌素相同，抑制T細胞活化基因的產生(對γ-干擾素和白細胞介素-2等淋巴因子的mRNA轉錄有抑制作用)，同時還抑制白細胞介素-2受體的表達，但不影響抑制型T細胞的活化。其口服制劑于1994年在美國首次上市。本品有如下特點：①該藥的免疫抑制作用無論在體外還是在體內試驗都是環孢菌素的數十倍到數百倍，在臨床上本品的有效濃度極低；②以往以環孢菌素為基礎的免疫抑制方案中，不可逆的慢性排斥反應問題依然存在，增加劑量雖然有進一步效果，但會帶來嚴重的不良反應，而他克莫司可減少肝腎移植受體的急、慢性排斥反應，其中用于腎移植后的急性排斥率只有14％，低于環孢菌素(32％)。③用他克莫司的患者，細菌和病毒感染率也較環孢菌素治療者的低，尤其對肝移植的功效高100倍，因而大大降低了臨床使用劑量，治療費用可降至原來的1/3～1/2，同時不良反應也明顯降低，此外它還具有低死亡率、高移植存活率、移植物具有良好成功率及對類甾醇的相對非依賴性等優點。

他克莫司除了在抑制器官移植排斥反應方面具有顯著療效外，還廣泛應用于斑禿、牛皮癬、銀屑病、魚鱗病、糖尿病、白塞氏病、變應性皮炎、類風濕性關節炎以及多發性硬化病等自身免疫疾病的治療。

目前，在他克莫司發酵液的浸提階段存在兩個主要難題：一是他克莫司浸提溶劑用量大，成本高；二是浸提收率普遍不高，均在90％以下。

專利CN102936253A公開了一種浸提他克莫司的方法，發酵液預處理后直接采用中等極性的溶媒浸提，由于菌餅含水量高，勢必造成溶媒用量大且后續回收困難。

專利CN101481715B公開了他克莫司的提取方法，發酵液利用板框壓濾機過濾，收集菌體，將濾餅轉入提取罐，使用丙酮等溶液作為浸提溶劑，浸提一次后收集濾液，再將濾渣使用上述方法進行二次浸提，收集二次浸提后的濾餅并將濾渣繼續循環上述步驟，總浸提3-4次后合并每次浸提得到濾液。但是采用上述方法一方面浸提工序復雜，勞動強度大，浸提周期長，生產效率低。另一方面浸提方法所用有機溶劑使菌體脫水，容易結塊，他克莫司溶出不均勻，且浸提量較少，浸提收率不理想。

當代流化床技術應用范圍非常的廣泛，在生物方面主要有污水處理、蛋白分離、以及植物、微生物中有效成分的提取分離。

發明內容

為了解決他克莫司浸提收率不高及提純過程中溶媒用量大，工藝步驟繁瑣的缺陷，浸提收率低等缺點，發明人經過大量的試驗，提供了一種流化床浸提他克莫司浸提新工藝。具體包括發酵液的預處理、菌餅閃蒸干燥、菌體流化床浸提。

菌粉加入流化介質如石英砂、陶瓷球、高鋁礬土，在溶劑作用下，這些介質與菌體絮凝成一定密度的顆粒，在一定條件下，能夠達到流化床的狀態，因為石英砂、高鋁礬土、超瓷球，都能起著很好絮凝作用，從而可以增加菌體的密度，不至于菌體漂浮在床層上面而流出，以保證流出浸提液澄清。在流化床下部通入向上流動的有機溶劑，增加溶劑流速，使菌體顆粒床高度不斷膨脹，直到達到一定的膨脹比例而處于穩定分層狀態，這種狀態更有利于從菌體中浸提他克莫司，研究發現菌體在流化狀態下比在攪拌浸提狀態下浸提效果好，流化床浸提收率可達94％以上；并且流化床浸提是采用循環浸提，這樣就可以節省大量的溶劑，縮短浸提時間。總之，相比較多次浸提而言流化床浸提更有效率。

本發明的技術方案包括如下步驟：

a.發酵液預處理及菌體收集：微生物發酵液是鏈霉菌發酵得到的發酵液；將鏈霉菌發酵液預處理后，用板框壓濾機過濾得到菌體；

b.閃蒸干燥：將菌體送入閃蒸干燥機進行干燥，制成含他克莫司的菌粉；

c.流化床的浸提：按重量比向菌粉中加入一定量的流化床介質混合均勻，裝流化床層析柱，用有機溶劑或有機溶劑和水的混合溶液循環浸提流化床菌體物，循環一定時間后，再用有機溶劑或有機溶劑和水的混合溶液置換出流化床里的他克莫司，最終得含他克莫司浸提液。所述有機溶劑和水的混合溶液都是新配置的。

本發明對步驟a中菌種進行了篩選，篩選后的菌株是吸水鏈霉菌(ACCC No.40417)菌株。其他菌株在使用本發明方法時，也可以顯著提高收率。