[發(fā)明專利]骨肉瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞鑒定試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610407678.0
• 申請日: 2016-06-08
• 公開（公告）號: CN107475356A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉蘇燕;吳詩揚;董艷
• 申請（專利權(quán)）人: 益善生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州華進聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司44224
• 代理人: 萬志香

1.一種骨肉瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞鑒定試劑盒，其特征在于，包括針對每種標(biāo)志基因的mRNA的捕獲探針和信號放大系統(tǒng)，所述標(biāo)志基因包括有如下兩類：選自EpCAM、CDH1、KRT8、KRT16、KRT17、KRT18、KRT19、KRT20中的至少兩種的上皮細(xì)胞標(biāo)志基因，選自MMP2、MMP9、VIM、CDH2、FN1、HIF-1a、SERPINE1、SURVIVIN、TWIST1、AKT2、SNAIL中的至少兩種的骨肉瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志基因；所述信號放大系統(tǒng)包括有末端修飾有熒光基團的擴增探針，或包括有擴增探針和末端修飾有熒光基團的標(biāo)記探針，不同種類目標(biāo)基因的熒光基團互不相同；其中，

所述捕獲探針用于連接標(biāo)志基因mRNA與擴增探針，每條捕獲探針從5’端到3’端的堿基組成依次為：可與待檢測的標(biāo)志基因mRNA結(jié)合的特異性序列P1、間隔臂序列、P2序列，所述P2序列為不存在發(fā)夾結(jié)構(gòu)，探針內(nèi)部和探針間不形成二聚體、不存在錯配，與P1、P4和標(biāo)志基因mRNA之間均不存在特異性結(jié)合的序列，針對同一類別的標(biāo)志基因mRNA的捕獲探針的P2序列相同；

每條擴增探針從5’端到3’端的堿基組成依次為：能與相應(yīng)捕獲探針的P2序列互補配對的P3序列、間隔臂序列、P4序列；所述P4序列為不存在發(fā)夾結(jié)構(gòu)，探針內(nèi)部和探針間不形成二聚體、不存在錯配、與P1、P2、P3和總mRNA之間均不存在特異性結(jié)合的序列；

每條標(biāo)記探針具有與相應(yīng)擴增探針P4序列互補配對的P5序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨肉瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞鑒定試劑盒，其特征在于，所述標(biāo)志基因的mRNA還包括有針對白細(xì)胞標(biāo)志基因的mRNA的一類，所述白細(xì)胞標(biāo)志基因為CD45。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨肉瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞鑒定試劑盒，其特征在于，所述上皮細(xì)胞標(biāo)志基因的捕獲探針中：針對EpCAM基因的特異性序列P1選自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10中的2條或2條以上，針對CDH1基因的特異性序列P1選自SEQ ID NO.11～SEQ ID NO.20中的2條或2條以上，針對KRT8基因的特異性序列P1選自SEQ ID NO.21～SEQ ID NO.30中的2條或2條以上，針對KRT16基因的特異性序列P1選自SEQ ID NO.31～SEQ ID NO.40中的2條或2條以上，針對KRT17基的因特異性序列P1選自SEQ ID NO.41～SEQ ID NO.50中的2條或2條以上，針對KRT18的基因特異性序列P1選自SEQ ID NO.51～SEQ ID NO.60中的2條或2條以上，針對KRT19的基因特異性序列P1選自SEQ ID NO.61～SEQ ID NO.70中的2條或2條以上，針對KRT20的基因特異性序列P1選自SEQ ID NO.71～SEQ ID NO.80中的2條或2條以上。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的骨肉瘤循環(huán)腫瘤細(xì)胞鑒定試劑盒，其特征在于，針對上皮細(xì)胞標(biāo)志基因的捕獲探針的P2序列為SEQ ID NO.201；所述上皮細(xì)胞標(biāo)志基因的擴增探針中，P3序列為SEQ ID NO.204，P4序列為SEQ ID NO.207。