[發明專利]一種恩諾沙星適配體/分子印跡雜化型上轉換熒光探針的制備方法

有效

• 申請號: 201610404506.8
• 申請日: 2016-06-08
• 公開（公告）號: CN106084114B
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 劉秀英;朱力杰;湯軼偉;勵建榮;高雪;張德福
• 申請（專利權）人: 渤海大學
• 主分類號: C08F220/06
• 分類號: C08F220/06;C08F222/14;B01J20/26;B01J20/30;G01N21/64
• 代理公司: 錦州遼西專利事務所(普通合伙)21225
• 代理人: 王佳佳

1.一種恩諾沙星適配體/分子印跡雜化型上轉換熒光探針的制備方法，其特征是：制備步驟如下：

（1）將Y₂O₃、Yb₂O₃和Tm₂O₃硝酸化后，加入EDTA、CTAB的乙二醇溶液、HF和濃硝酸，進行水熱反應，制得上轉換發光材料NaYF₄:Yb,Tm；

（2）將步驟（1）制備的上轉換發光材料0.05g-0.2g分散于60mL-100mL異丙醇中；依次加入20mL-40mL的蒸餾水和2.5mL-5mL質量濃度為25%的氨水，室溫下攪拌15min-30min；滴加40μL-80μL的正硅酸乙酯(TEOS)，攪拌3h后；滴加200μL-400μL的3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES），室溫下反應1h-2h后停止攪拌，室溫下陳化2h-6h；離心分離，得到的固體物質經蒸餾水洗滌三次，60℃-90℃烘干，得到硅烷化上轉換發光材料；

（3）將步驟（2）制得的硅烷化上轉換發光材料10mg-50mg，分散于5mL-8mL濃度為10mmol/L磷酸緩沖鹽溶液（PBS）中，加入1.25mL質量濃度為25%戊二醛溶液，在室溫下振蕩1h-2h，離心分離，得到的固體物質用10mmol/L的PBS洗三次，重新分散于5mL-8mL濃度為10mmol/L磷酸緩沖鹽溶液（PBS）中，加入1mL濃度為0.1mg/mL-0.2mg/mL的親和素溶液中，在37℃振蕩17h-30h，離心分離，得到的固體物質用10mmol/L的PBS洗三次，得到親和素修飾的上轉換發光材料；

（4）將步驟（3）制備的親和素修飾的上轉換發光材料10mg-50mg均勻分散于10mmol/L的PBS中，加入200μL-300μL濃度為1μmol/L的恩諾沙星適配體溶液，所述適配體核酸序列為5’-CCC ATC AGG GGG CTA GGC TAA CAC GGT TCG GCT CTC TGA GCC CGG GTT ATT TCA GGG GGA -biotin-3’，在37℃振蕩17h-30h，離心分離，得到的固體物質用10mmol/L的PBS洗三次，得到恩諾沙星適配體修飾的上轉換發光材料；

（5）將步驟（4）制備的恩諾沙星適配體修飾的上轉換發光材料10mg-50mg分散于10mmol/L的PBS中，加入1mL濃度為10μg/mL-30μg/mL恩諾沙星溶液，在37℃振蕩1h-2h，離心分離，收集固體物質；

（6）將步驟（5）得到的固體物質均勻分散于致孔劑中，加入功能單體，振蕩15min-30min，加入交聯劑和引發劑，所述固體物質的質量與致孔劑的體積之比為10mg:5mL-10mL，固體物質的質量與功能單體的摩爾比10mg:0.2mmol-0.6mmol，固體物質質量與交聯劑的摩爾比10mg:10mmol-20mmol，固體物質與引發劑的質量比為10mg:0.01g-0.08g；在60℃-80℃水浴中振蕩反應12h-24h，振蕩速度為150轉/分-300轉/分，將產物置于甲醇中反復洗脫5次-10次，再用解離緩沖液反復洗脫5次-10次，制得恩諾沙星適配體/分子印跡雜化型上轉換熒光探針。

2.根據權利要求1所述的恩諾沙星適配體/分子印跡雜化型上轉換熒光探針的制備方法，其特征是：所述致孔劑為乙腈，功能單體為甲基丙烯酸，交聯劑為三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯，引發劑為偶氮二異丁腈。