[發明專利]基于分子印記納米磁珠與質譜聯用用于大鼠糞便中三七總皂苷代謝物質群的檢測方法

在審

• 申請號: 201610403918.X
• 申請日: 2016-06-08
• 公開（公告）號: CN107478759A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 周學敏;洪俊麗;蔡奇志;楊載月;陳寧
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/08
• 代理公司: 北京思創畢升專利事務所11218
• 代理人: 高爽

1.一種基于分子印記納米磁珠與LTQ-Orbitrap-MS技術聯用用于大鼠糞便中三七總皂苷代謝物質群的分析方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

(1)制備印記磁珠：將Fe₃O₄@SiO₂納米粒分散于致孔劑中，加入功能單體，交聯劑，引發劑，模板分子人參皂苷Rb₁，攪拌，室溫聚合20h，再用乙酸和甲醇混合溶液洗去模板分子，真空干燥；

(2)樣品處理：大鼠給藥三七總皂苷水溶液后，分別于4,8,12,16,20,24,36,72小時的時間點取糞便樣品，將每份樣品取出相同的量制成混合糞便，隨后混合糞便樣品處理如下：將混合糞便加入樣品重3倍的預處理溶劑渦旋、離心后，取上清液，氮氣吹干，預處理溶劑復溶，加入印記磁珠進行吸附解析；

(3)樣品分析：

利用LTQ-Orbitrap-MS分析儀對解析液進行分析，鑒定三七總皂苷的代謝物質群；高效液相條件：流動相A：0.2％甲酸水溶液；流動相B：甲醇；梯度條件：0–2min5％B；2–10min 5％-50％B；11–15 50％-95％B and；18–18.1 95％-5％B；18.1–23min 5％A；流速：0.3ml/min；柱溫：35℃；質譜條件：N₂流速：10.0l/min；N₂溫度：320℃；輔助離子加熱：60℃；毛細管電壓：3500V；碰撞能：55V。

2.根據權利要求1中所述的基于分子印記納米磁珠與LTQ-Orbitrap-MS技術聯用用于大鼠糞便中三七總皂苷代謝物質群的分析方法，其特征在于：步驟1所述的功能單體為三乙氧基硅烷，人參皂苷Rb1與三乙氧基硅烷的摩爾比為(1～4):(1～16)。

3.根據權利要求1中所述的基于分子印記納米磁珠與LTQ-Orbitrap-MS技術聯用用于大鼠糞便中三七總皂苷代謝物質群的分析方法，其特征在于：步驟1所述的交聯劑為正硅酸四乙酯，正硅酸四乙酯與三乙氧基硅烷的摩爾比為(1～5):(1～7)。

4.根據權利要求1中所述的基于分子印記納米磁珠與LTQ-Orbitrap-MS技術聯用用于大鼠糞便中三七總皂苷代謝物質群的分析方法，其特征在于：步驟1所述的致孔劑為甲醇，Fe3O4@SiO2納米粒與致孔劑的比例為(10～50mg):(10～30ml)。

5.根據權利要求1中所述的基于分子印記納米磁珠與LTQ-Orbitrap-MS技術聯用用于大鼠糞便中三七總皂苷代謝物質群的分析方法，其特征在于：步驟1所述的引發劑為HAC，引發劑與功能單體的體積比為(1～4):(1～8)。

6.根據權利要求1中所述的基于分子印記納米磁珠與LTQ-Orbitrap-MS技術聯用用于大鼠糞便中三七總皂苷代謝物質群的分析方法，其特征在于：步驟2所述的混合糞便每個時間點取樣量為0.5g。

7.根據權利要求1中所述的基于分子印記納米磁珠與LTQ-Orbitrap-MS技術聯用用于大鼠糞便中三七總皂苷代謝物質群的分析方法，其特征在于：步驟2所述的混合糞便使用甲醇作為預處理溶劑。

8.根據權利要求1中所述的基于分子印記納米磁珠與LTQ-Orbitrap-MS技術聯用用于大鼠糞便中三七總皂苷代謝物質群的分析方法，其特征在于：步驟2所述的印記磁珠的用量為每100mg混合糞便加入印記磁珠10～30mg。

9.根據權利要求1中所述的基于分子印記納米磁珠與LTQ-Orbitrap-MS技術聯用用于大鼠糞便中三七總皂苷代謝物質群的分析方法，其特征在于：步驟2所述的解析液為醋酸甲醇混合溶液，用量為每10～50mg印記磁珠使用1～5ml解析液。