[發(fā)明專利]一種定量檢測超敏C反應(yīng)蛋白和脂蛋白磷脂酶A2的熒光免疫層析方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610401854.X
• 申請(qǐng)日: 2016-06-09
• 公開（公告）號(hào): CN107490692A
• 公開（公告）日: 2017-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李亞星;劉鳳鳴;劉冰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 常州博聞迪醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/92;G01N33/558;G01N33/533
• 代理公司: 暫無信息
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1.一種定量檢測超敏C反應(yīng)蛋白和脂蛋白磷脂酶A2的熒光免疫層析方法，包含有血液、抗超敏C反應(yīng)蛋白抗體、抗脂蛋白磷脂酶A2抗體、熒光試劑和檢測器，具有如下特征：

1）所述超敏C反應(yīng)蛋白抗體為抗超敏C反應(yīng)蛋白單克隆抗體和抗超敏C反應(yīng)蛋白多克隆抗體的一種或組合；

2）所述抗脂蛋白磷脂酶A2抗體為抗脂蛋白磷脂酶A2單克隆抗體和抗脂蛋白磷脂酶A2多克隆抗體的一種或組合；

3）所述熒光試劑為含有所述熒光物質(zhì)的液相和/或固相材料，所述熒光物質(zhì)為有機(jī)熒光染料或稀土元素?zé)晒馊玖系囊环N或組合；

4）所述檢測器為熒光檢測器。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種定量檢測超敏C反應(yīng)蛋白和脂蛋白磷脂酶A2熒光免疫檢測方法，其特征在于所述方法包括如下步驟：

1）用化學(xué)交聯(lián)或生物分子間特異性作用將熒光染料偶聯(lián)到特異性抗體1表面，得到熒光染料修飾的特異性抗體載體，熒光染料的發(fā)射波長范圍為300～1300nm；

2）制備熒光免疫層析試紙條，所述熒光免疫層析試紙條包括標(biāo)記墊、層析膜、吸水墊和底板；

3）配置清洗緩沖液，所述清洗緩沖液包含牛血清白蛋白、蔗糖和表面活性劑，pH值為7.0-8.0，其中，牛血清白蛋白的濃度為0.05～2％，蔗糖的濃度為1～15％，表面活性劑的濃度為0.05～2％；

4）將步驟1）得到的所述熒光染料修飾的特異性抗體1固定到所述標(biāo)記墊上；

5）在所述層析膜上分別設(shè)置一條檢測線和一條質(zhì)控線，其中，質(zhì)控線上固定有能與所述熒光染料修飾的特異性抗體載體相結(jié)合的生物分子，檢測線上固定有特異性抗體2；

6）將所述標(biāo)記墊、層析膜、吸水墊和底板組合，構(gòu)建成熒光免疫層析試紙條；

7）將收集的血液加載到所述標(biāo)記墊上，所述血液中所含有的所述抗原與所述熒光染料修飾的特異性抗體結(jié)合，形成“熒光染料-特異性抗體1-抗原”復(fù)合物，即復(fù)合物1；

8）含有所述復(fù)合物1的液相流經(jīng)層析膜，形成“熒光染料-特異性抗體1-抗原-特異性抗體2”復(fù)合物，即復(fù)合物2，并被捕獲固定在所述固相膜上；

9）用所述熒光檢測器檢測被間接固定到所述固相膜上的熒光染料產(chǎn)生的熒光值，以檢測所述血液中抗原的含量。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種定量檢測超敏C反應(yīng)蛋白和脂蛋白磷脂酶A2熒光免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述的標(biāo)記墊上的熒光染料發(fā)射波長為550-800nm。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種定量檢測超敏C反應(yīng)蛋白和脂蛋白磷脂酶A2熒光免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述層析膜和所述底板在大于550nm時(shí)熒光很弱或不含有熒光劑，優(yōu)選底板為白色，表面附有不干膠，且兩者均不含熒光劑。