[發(fā)明專利]TNFR1/MAP4K4/ARP3對(duì)裸鼠膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)影響的腦內(nèi)模型構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610398151.6
• 申請(qǐng)日: 2016-06-07
• 公開（公告）號(hào): CN105879017B
• 公開（公告）日: 2017-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 藺玉昌;張敬寧;張燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 無錫市第二人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K38/45
• 分類號(hào): A61K38/45;A61K38/17;A61K38/00
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙)44248
• 代理人: 胡吉科

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的疾病動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，具體涉及TNFR1/MAP4K4/ARP3對(duì)裸鼠膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)影響的腦內(nèi)模型構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

長(zhǎng)期以來對(duì)于膠質(zhì)瘤侵襲性生長(zhǎng)的研究主要著重于膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)相關(guān)癌基因的作用機(jī)制，而忽略了炎癥微環(huán)境的作用。1863年，現(xiàn)代病理學(xué)奠基人Rudolf Virchow就提出假說：炎癥微環(huán)境是導(dǎo)致包括腫瘤在內(nèi)的多種慢性疾病的原因之一。最近越來越多的實(shí)驗(yàn)和臨床研究已經(jīng)證實(shí)了這一假說，而這也是當(dāng)前腫瘤研究的熱點(diǎn)。組織損傷，無論是物理，化學(xué)或感染所致，均會(huì)發(fā)生炎癥反應(yīng)，是機(jī)體對(duì)傷害刺激的防御反應(yīng)的一部分，但機(jī)體免疫功能未能控制的炎癥反應(yīng)將會(huì)擾亂細(xì)胞的微環(huán)境，從而導(dǎo)致癌癥相關(guān)基因和細(xì)胞信號(hào)蛋白的翻譯后修飾的改變；同時(shí)巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞可導(dǎo)致包括腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-6（interleukin- 6，IL-6）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β)等在內(nèi)的非特異性炎性細(xì)胞因子上調(diào)，從而支持腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在惡性膠質(zhì)瘤中，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)往往提示腫瘤患者預(yù)后的不良，說明炎癥微環(huán)境在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用。因此需要構(gòu)建TNFR1/MAP4K4/ARP3膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)影響的動(dòng)物模型。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供TNFR1/MAP4K4/ARP3對(duì)裸鼠膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)影響的腦內(nèi)模型構(gòu)建方法。

TNFR1/MAP4K4/ARP3對(duì)裸鼠膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)影響的腦內(nèi)模型構(gòu)建方法，其特征為包括以下步驟：步驟1，分別構(gòu)建TNFR1、MAP4K4與ARP3過表達(dá)、小干擾的穩(wěn)定細(xì)胞株，以1×10⁸密度在腦立體定位儀下注射至裸鼠皮質(zhì)內(nèi)，構(gòu)建裸鼠膠質(zhì)瘤腦內(nèi)模型；

步驟2 ，4周后收集腦組織，檢測(cè)腫瘤形成的大小、重量情況，并比較其與裸鼠生存率的關(guān)系，HE染色檢測(cè)腫瘤侵襲情況；

步驟3，獲取裸鼠腫瘤組織Western Blot及免疫組化檢測(cè)TNFR1、MAP4K4與ARP3的表達(dá)情況；

步驟4，組織消化，原代細(xì)胞培養(yǎng)，分析并驗(yàn)證TNFR1/MAP4K4/ARP3三聚體對(duì)裸鼠原代膠質(zhì)瘤細(xì)胞肌動(dòng)蛋白聚合、細(xì)胞偽足形成及細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響。

進(jìn)一步的，在步驟1中，分別構(gòu)建TNFR1過表達(dá)、小干擾及不與MAP4K4相互作用的穩(wěn)定細(xì)胞株；

在步驟3中，獲取裸鼠腫瘤組織Western Blot及免疫組化檢測(cè)TNFR1及MAP4K4的表達(dá)情況；

在步驟4中，驗(yàn)證并分析TNFR1與MAP4K4的相互作用對(duì)裸鼠原代膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響。

進(jìn)一步的，在步驟1中，分別構(gòu)建MAP4K4過表達(dá)、小干擾及不與ARP3相互作用的穩(wěn)定細(xì)胞株；

在步驟3中，獲取裸鼠腫瘤組織Western Blot及免疫組化檢測(cè)MAP4K4及ARP3的表達(dá)情況；

在步驟4中，驗(yàn)證并分析MAP4K4與ARP3的相互作用對(duì)裸鼠原代膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響。

構(gòu)建裸鼠膠質(zhì)瘤腦內(nèi)模型，探討干預(yù)TNFR1/MAP4K4/ARP3相互作用對(duì)膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的影響。將有助于揭示腫瘤微環(huán)境炎性因子與膠質(zhì)瘤侵襲性生長(zhǎng)的關(guān)系，為膠質(zhì)瘤的治療提供新的靶點(diǎn)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

步驟1，分別構(gòu)建TNFR1過表達(dá)、小干擾及不與MAP4K4相互作用的穩(wěn)定細(xì)胞株，以1×10⁸密度在腦立體定位儀下注射至裸鼠皮質(zhì)內(nèi)，構(gòu)建裸鼠膠質(zhì)瘤腦內(nèi)模型；

步驟2，4周后收集腦組織，檢測(cè)腫瘤形成的大小、重量情況，并比較其與裸鼠生存率的關(guān)系，HE染色檢測(cè)腫瘤侵襲情況；

步驟3，獲取裸鼠腫瘤組織Western Blot及免疫組化檢測(cè)TNFR1及MAP4K4的表達(dá)情況。

步驟4，組織消化，原代細(xì)胞培養(yǎng)，驗(yàn)證并分析TNFR1與MAP4K4的相互作用對(duì)裸鼠原代膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響。

實(shí)施例2：

步驟1，分別構(gòu)建MAP4K4過表達(dá)、小干擾及不與ARP3相互作用的穩(wěn)定細(xì)胞株，以1×10⁸密度在腦立體定位儀下注射至裸鼠皮質(zhì)內(nèi)，構(gòu)建裸鼠膠質(zhì)瘤腦內(nèi)模型；

步驟2，4周后收集腦組織，檢測(cè)腫瘤形成的大小、重量情況，并比較其與裸鼠生存率的關(guān)系，HE染色檢測(cè)腫瘤侵襲情況；