[發明專利]一種同時測定酶促反應液中DL-ATC、L-半胱氨酸和L-胱氨酸含量的方法

有效

• 申請號: 201610396483.0
• 申請日: 2016-06-07
• 公開（公告）號: CN106596749B
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 趙東明;歐陽暉
• 申請（專利權）人: 湖北遠大生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京元周律知識產權代理有限公司 11540
• 代理人: 李花

1.一種同時測定酶促反應液中DL-ATC、L-半胱氨酸和L-胱氨酸含量的方法，其特征在于，所述方法包括先調節所述酶促反應液的pH值范圍為0.5-5.0，再用HPLC法對酶促反應液中DL-ATC、L-半胱氨酸和L-胱氨酸進行分離并且同時測定；其中，

在進行HPLC法檢測時使用的色譜柱為正相硅膠鍵合二醇色譜柱。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在進行HPLC法檢測時，檢測條件為：水相溶液pH為1.0～5.0，水相-有機相體積比為15:85～30:70，檢測波長為190-300nm，柱溫為20～40℃，進樣量為5～20μL。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述檢測波長為200nm。

4.根據權利要求1-3中任意一項所述的方法，其特征在于，在調節所述酶促反應液的pH值時所用的酸為鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、醋酸或甲酸中的一種或多種。

5.根據權利要求1-4中任意一項所述的方法，其特征在于，所述酶促反應液為堿性酶促反應液。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述堿性酶促反應液的pH值范圍為7.5-9.5。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述堿性酶促反應液的pH值范圍為7.5-9.5，且所述堿性酶促反應液為DL-ATC在酶催化下轉化為L-半胱氨酸的反應溶液。

8.根據權利要求1-7中任意一項所述的方法，其特征在于，調節所述酶促反應液的pH為0.5、1.0、2.0、3.0、4.0或5.0。

9.根據權利要求1-8中任意一項所述的方法，其特征在于，所述的方法具體包括如下步驟:

(1)混合對照溶液的配制：

L-半胱氨酸對照貯備溶液：稱取L-半胱氨酸對照品，加入磷酸二氫銨溶液溶解,得到L-半胱氨酸對照貯備溶液；

DL-ATC與L-胱氨酸混合對照貯備溶液：稱取DL-ATC和L-胱氨酸對照品各適量，混合后，加入磷酸二氫銨溶液溶解，得到DL-ATC與L-胱氨酸混合對照貯備溶液；

混合對照溶液：臨用前分別取L-半胱氨酸對照貯備溶液、DL-ATC和L-胱氨酸混合對照貯備溶液，混合后，加入磷酸二氫銨溶液溶解并稀釋得到混合對照溶液；

(2)供試品溶液配制：

取酶法生產L-半胱氨酸酶促反應液，立即加入鹽酸調節溶液pH，取上述溶液適量，加入磷酸二氫銨溶液溶解并稀釋至上述混合對照溶液的濃度，過濾，取濾液作為供試品溶液；

(3)檢測

分別量取混合對照溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀中，分別進行檢測，其檢測條件為在進行HPLC法檢測時；檢測條件為：水相溶液pH為1.0～5.0，水相-有機相體積比為15:85～30:70，檢測波長為200nm，柱溫為20～40℃。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，過濾時采用0.45μm的水系過濾膜過濾，續取濾液，作為供試品溶液。

11.根據權利要求9或10所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，在進行混合對照溶液的配制時，磷酸二氫銨溶液溶解并稀釋成分別含有DL-ATC、L-半胱氨酸和L-胱氨酸濃度為0.2～0.5、0.1～0.5、0.1～0.5mg/ml的混合對照溶液。

12.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，還包括在線性范圍內，采用外標法計算DL-ATC、L-半胱氨酸、L-胱氨酸含量。